Efeito de antibacterianos na qualidade espermática e na microbiota do sêmen ovino

Abstract

Diversas bactérias são identificadas nas amostras de sêmen ovino e algumas podem apresentar efeitos negativos na sua qualidade. Assim, os objetivos deste trabalho foram: identificar e quantificar a microbiota do sêmen fresco ovino, avaliar o uso prévio do higienizante Kilol-L® e testar a sensibilidade das cepas bacterianas frente ao antibiograma; avaliar o efeito do uso dos antibióticos ceftiofur e gentamicina, em diferentes concentrações, no meio diluidor TRIS-gema-glicerol, nos parâmetros de avaliação do sêmen e da contaminação bacteriana; avaliar o efeito da adição de diferentes antibióticos e combinações no meio de criopreservação do sêmen, avaliando a qualidade e viabilidade do mesmo antes e depois da criopreservação. No capítulo 2 foram avaliados 24 ovinos machos da raça Santa Inês, aptos à reprodução, sendo eles agrupados em dois grupos de sistemas de criação, um a pasto (n=12) e outro em confinamento (n=12). Os resultados microbiológicos indicaram que do total de 120 ejaculados, 99 tiveram crescimento bacteriano correspondendo a 82,5% das amostras. Os gêneros bacterianos mais isolados foram Bacillus spp., Corynebacterium spp., Escherichia coli, Listeria spp., Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. Dos antibióticos testados, a gentamicina foi 100% eficaz para Bacillus spp. e E. coli. O Ceftiofur foi eficaz para todas as bactérias isoladas, exceto com a amostra de Rodococcus equi. O uso do antisséptico Kilol-L® na concentração 1:250 reduziu o número de unidades formadoras de colônias (UFC/ml) do ejaculado sem prejudicar a qualidade seminal. No capítulo 3, foram selecionados dois grupos: ceftiofur e gentamicina. Os tratamentos do grupo ceftiofur foram: sem antibióticos, 10μg/ml, 25μg/ml, 50μg/ml e 100μg/ml, e os tratamentos do grupo gentamicina foram: sem antibiótico, 50μg/ml, 100μg/ml, 250μg/ml e 500μg/ml. Não houve diferença entre os tratamentos nos dois grupos quanto à motilidade espermática, isolamento bacteriano e UFC/ml. A utilização dos antibióticos ceftiofur e gentamicina, em diferentes concentrações no meio de criopreservação, não diferiram do meio sem antibiótico nos parâmetros seminais e bacteriológicos. No capítulo 4, foi analisado o efeito da adição de diferentes antibióticos na criopreservação de sêmen ovino, avaliando-se a qualidade e viabilidade antes e depois da criopreservação. Os ejaculados foram submetidos aos seguintes tratamentos: sem antibiótico, associação de penicilina-estreptomicina (100.000UI-100mg/ml), ceftiofur (10μg/ml), gentamicina (50μg/ml) e a associação de gentamicina-tilosinalincomicina- espectinomicina (250-50-150-300μg/ml). Os tratamentos utilizados não apresentaram diferença (p>0,05) quando comparados com a quantidade total de bactérias presentes, cepas bacterianas isoladas e motilidade das células espermáticas. Os principais gêneros bacterianos isolados foram Bacillus spp., Corynebacterium spp., Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. Tais resultados indicam que a adição de antibióticos não é necessária, no meio diluidor, quando medidas higiênicas e de assepsia são previamente utilizadas ao processo de criopreservação do sêmen ovino. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT

Several bacteria are identified in semen samples and some present a negative effect on their quality. The objectives of this study were to identify and quantify the fresh semen sheep microbiota, evaluating the previous use of sanitizing Kilol-L® and test the bacterial strains against antibiogram; evaluate the effect of antibiotic therapy with ceftiofur and gentamicin, in different concentrations in the diluter medium with tris-gem-glycerol, in parameter of semen evaluation and bacterial contamination; evaluate the effect of addition different antibiotics and combinations in the semen cryopreservation medium, assessing the quality and viability of the sample before and after cryopreservation. In chapter 2 were evaluated 24 Santa Inês male sheep, able to reproduce, and they were grouped into two breeding systems, one on pasture (n = 12) and another confined (n = 12). The microbiological results indicated that the total of 120 ejaculates, 99 had bacterial growth representing 82.5% of the samples. The most frequently isolated bacterial genus were Bacillus spp., Corynebacterium spp., Escherichia coli, Listeria spp., Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. Both antibiotics tested, gentamicin was 100% effective for Bacillus spp. and E. coli. The Ceftiofur was effective for all isolates, except with the sample Rodococcus equi. The use of antiseptic Kilol-L® at a concentration of 1:250 reduced the number of colony forming units (CFU/ml) of the ejaculate without affecting the semen quality. In chapter 3, we selected two groups: ceftiofur and gentamicin. The ceftiofur treatments groups were: without antibiotics, 10μg/ml, 25μg/ml, 50μg/ml and 100μg/ml, and gentamicin treatments group were: without antibiotic, 50μg/ml, 100μg/ml, 250μg/ml and 500μg / ml. There was no difference between treatments in the two groups in terms of sperm motility, bacterial isolation and CFU/ml. The use of the ceftiofur antibiotic and gentamicin at different concentrations in the cryopreservation medium not differ from the antibiotic-free medium in semen and bacteriological parameters. In chapter 4, we analyzed the effect of different antibiotic addition in the cryopreservation of ram semen, evaluating the quality and viability before and after cryopreservation. The ejaculates were submitted to the following treatments: no antibiotic, combination of penicillin-streptomycin (100.000UI-100mg/ml), ceftiofur (10μg/ml), gentamicin (50μg/ml) and combination of gentamicin, tylosin, lincomycin-spectinomycin (250 -50-150-300μg/ml). The treatments showed no difference (p> 0.05) when compared with the total amount of bacteria, bacterial strains isolated and sperm cells motility. The major bacterial strains isolated were Bacillus spp., Corynebacterium spp., Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. These results indicate that the addition of antibiotics is not necessary in the diluter medium, when hygienic and aseptic measures are previously used in the sheep semen cryopreservation process.