Genotipagem de cepas de Staphylococcus aureus isolados de mastites subclínicas bovina no Distrito Federal e Entorno

Abstract

O Staphylococcus aureus está entre os microrganismos mais comumente isolados em mastite subclínica bovina, sendo muito prejudicial para os tecidos produtores de leite devido à liberação de toxinas e de difícil tratamento. O objetivo deste trabalho foi analisar o perfil de resistência antimicrobiana e genotitipificar os genes da coagulase e espécie-específicos dos S. aureus nas propriedades do Distrito federal e Entorno. Foram analisadas 47 amostras de leite de 116 animais de diversas raças que apresentaram um escore de 3+ no teste do Californian Mastit Test. Foi incorporado mais 28 amostras do banco de germoplasma do Laboratório de Microbiologia (MicroMedVet) da Universidade de Brasília aos testes, totalizando 75 amostras. O teste do perfil de resistência antimicrobiana demostrou que a penicilina (71,2%), ampicilina (52,9%) e enrofloxacina (39,9%) foram os antibióticos que mais apresentaram resistência. Os maiores índices de sensibilidades antimicrobianas foram visto na gentamicina (79,8%), neomicina (76,9%), norfloxacina (76,9%), cefalexina (74,1%), cefazolina (74,1%), lincomicina (74,1%), oxacilina (74,1%), tetraciclina (74,1%), tobramicina (74,1%), ceftiofur (71,2%). A sensibilidade da enrofloxacina apresentou uma discrepância muito elevada quando comparada a estudos anteriores, pois no presente trabalho seu índice foi de apenas 51,3%. Os genes da coagulase (CoA) obtiveram quatro diferentes tamanhos de bandas do produto da PCR nas amostras testadas. Foram elas 490bp (2,66%), 570bp (33,35%) 680bp (41,33%), e 780bp (22,66%). O gene de espécie-específico amplificou todas as 75 amostras com fragmentos de 1153bp e mostrou ser uma ferramenta útil na identificação rápida de S. aureus. Os resultados apresentados nesse estudo demostra que o perfil de resistência antimicrobiana vem se tornando algo mundial e que técnicas simples podem facilitar a sua identificação e também mapear o polimorfismo ocorrido nos genes da coagulase. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT

Staphylococcus aureus is one of the most commonly microorganisms isolated from bovine subclinical mastitis, it is very damaging to the producing milk tissues due to the release of toxins and difficulty of treatment. The objective of this study was to analyze the antimicrobial resistance profile and genotyping genes of coagulase and species-specific of S. aureus in the properties of the Distrito Federal and Entorno. We analyzed 47 milk samples from 116 animals of several breeds that showed score of 3+ in the Californian Mastit Test. Another 28 samples from the germplasm bank of the University of Brasília Microbiology Laboratory (MicroMedVet) were incorporated to the tests, totaling 75 samples. Testing of the antimicrobial resistance profile showed that penicillin (71.2%), ampicillin (52.9%) and enrofloxacin (39.9%) were the antibiotics that showed more resistance. The highest rates of antimicrobial sensitivities were seen in gentamicin (79.8%), neomycin (76.9%), norfloxacin (76.9%), cephalexin (74.1%), cefazolin (74.1%), lincomycin (74.1%), oxacillin (74.1%), tetracycline (74.1%), tobramycin (74.1%), ceftiofur (71.2%). The sensitivity of enrofloxacin showed a very high discrepancy when compared to previous works, at the present study its index was only 51.3%. Coagulase genes (CoA) had four different PCR product bands sizes in the tested samples. These were 490bp (2.66%), 570bp (33.35%) 680bp (41.33%), and 780bp (22.66%). The species-specific gene amplified all the 75 samples with fragments of 1153bp and proved to be a useful tool for S. aureus rapid identification. The results presented in this study shows that the antimicrobial resistance profile is becoming worldwide and that simple techniques can facilitate their identification and also map the polymorphism occurred in the coagulase genes.