Prospecção de peptídeos antimicrobianos da secreção cutânea de anfíbios do gênero Phyllomedusa

Abstract

A secreção cutânea de anfíbios é uma rica fonte de diversas moléculas bioativas. Um importante grupo de tais moléculas são os peptídeos antimicrobianos. Anuros da subfamília Phyllomedusinae (Hylidae-Amphibia) expressam diversos componentes pertencentes a este grupo. O presente estudo descreve a purificação e determinação da estrutura primária de vários análogos pertencentes às famílias de peptídeos antimicrobianos encontradas em anfíbios do gênero Phyllomedusa. O extrato total dos anfíbios Phyllomedusa burmeisteri, Phyllomedusa rohdei e Phyllomedusa tomopterna mostrou-se uma complexa mistura de peptídeos. Dentre estes, 40 moléculas pertencentes (homologia) a quatro famílias de peptídeos antimicrobianos (dermaseptinas, filoseptinas, hiposinas e dermatoxinas) foram identificados e caracterizados quanto à sua estrutura primária. Os peptídeos foram purificados por meio de um sistema RP-HPLC, seqüenciados e analisados por meio de espectrometria de massa MALDI TOF/TOF e ESI Q-TOF. Degradação de Edman foi utilizada para confirmação da estrutura primária de três peptídeos (Filoseptina 08, DStomo01 e DD L). Adicionalmente, um análogo de hiposina, denominado hiposina 6, foi identificado. PS 08 e hiposina 6 foram sintetizados e testados contra uma bactéria patogênica de plantas (Xanthomonas citrii) e contra bactérias patogênicas de humanos (Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa). Como comparação, duas dermaseptinas identificadas em Phyllomedusa tarsius, DRT 12 e DRT 15, foram purificadas e testadas contra Xanthomonas citrii e contra os patógenos humanos, respectivamente. O presente trabalho contribui para o aumento do conhecimento da biodiversidade relativa a esse grupo de moléculas, adicionando um relevante número de novos análogos à miríade de peptídeos antimicrobianos já conhecidos na subfamília Phyllomedusinae. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT

Amphibian skin secretion is considered a rich source of bioactive molecules. One important group of such molecules is the antimicrobial peptides group. Frogs from the Phyllomedusinae subfamily (Hylidae-Amphibia) possess several components of this group. The present work describes the purification and primary structure determination of several analogs which belong to antimicrobial peptides families found in amphibians of the genus Phyllomedusa (Hylidae-Amphibia). The crude extract obtained from the amphibians Phyllomedusa burmeisteri, Phyllomedusa rohdei and Phyllomedusa tomopterna was demonstrated to be a complex mixture of peptides. Among them, 40 molecules belonging to four families of antimicrobial peptides (dermaseptins, phylloseptins, hyposins and dermatoxins) were identified and their primary structures were obtained. The peptides were purified in a RP-HPLC system and sequenced and analyzed by MALDI TOF/TOF and ESI Q-TOF mass spectrometry. Three peptides had their primary structure confirmed by Edman degradation (Phylloseptin 08, DStomo01 and DD L). A hyposin analog, named hyposin 6, was also identified. PS 08 and hyposin 6 were synthesized and tested against a plant pathogen (Xanthomonas citrii) and against human pathogens (Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa). As a comparison, DRT 12 and DRT 15, two dermaseptins previously identified in Phyllomedusa tarsius secretion, were purified in a RP-HPLC system and tested against Xanthomonas citrii and the human pathogens, respectively