Análise do secretoma da interação entre Trichoderma Harzianum e os estagios de desenvolvimento do fitopátogeno Sclerotinia Sclerotiorum

Abstract

Trichoderma harzianum tem recebido considerável atenção como potencial agente de controle biológico, agindo como um micoparasita contra diversos fitopatógenos habitantes do solo, incluindo Sclerotinia sclerotiorum. O objetivo deste estudo foi vizualizar por microscopia eletrônica de varredura (MEV), a interação entre T. harzianum e S. sclerotiorum, assim como mapear e identificar as proteínas secretadas por T. harzianum quando cultivado na presença de parede celular, apotécio e escleródio de S. sclerotiorum. Nos testes de interação por MEV, T. harzianum provou ser um potente antagonista de S. sclerotiorum, mostrando que as hifas do antagonista penetraram nas estruturas do fitopatógeno. Posteriomente foram construídos os mapas bidimensionais permitindo a visualização das diferentes proteínas secretadas de T. harzianum quando cultivadas na presença de diferentes etapas da vida de S. sclerotiorum sendo que um total de 139 spots foram analisados, e destes foram identificados 63. Das proteínas identificadas no secretoma 5 são exclusivas quando cultivadas em meio contendo apotécio, 9 em meio contendo escleródio e 4 contendo parede celular sendo 11 proteínas expressas nas 3 condições. A expressão dos genes foi feita usando PCR em tempo real a partir de RNA total de T. harzianum quando cultivadas na presença das três fases do ciclo de vida S. sclerotiorum (micélio, escleródios e apotécio) confirmando as proteínas secretadas. Nossos resultados fornecem um passo para a compreensão do processo de micoparasitismo entre T. harzianum durante sua interação com S.sclerotiorum permitindo a identificação das diferentes proteínas secretadas quando cultivadas com as fases do ciclo de vida desse fitopatógeno. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT

Trichoderma harzianum has received considerable attention as a potential biological control agent, acting as a mycoparasite against several soilborne plant pathogens including Sclerotinia sclerotiorum. The objective of this study was to visualize electron microscopy (SEM), the interaction between T. harzianum and S. sclerotiorum as well as map and identify the proteins secreted by T. harzianum when grown in the presence of cell wall, and sclerotia of apothecium S. sclerotiorum. In MEV interaction tests, T. harzianum proved to be a potent antagonist of S. sclerotiorum, showing that antagonist hyphae penetrated pathogen structures. After dimensional maps were constructed allowing the visualization of the different secreted proteins from T. harzianum when cultured in the presence of different stages of the life of S. sclerotiorum with a total of 139 spots were analyzed and identified 63. Of these proteins identified in secretome 5 are unique when grown in medium containing apothecium, 9 in medium containing sclerotia and 4 containing cell wall being 11 proteins expressed in the 3 conditions. Expression of the gene was done using real-time PCR from total RNA of T. harzianum when cultured in the presence of the three phases of the lifecycle S. sclerotiorum (mycelium and sclerotia apothecium) confirming secreted proteins. Our results provide a step towards understanding the mycoparasitism process between T. harzianum during their interaction with S.sclerotiorum allowing the identification of various secreted proteins when grown with the phases of the life of this pathogen cycle.