Imunidade inata em cães com infecção natural pela Leishmania spp

Abstract

As leishmanioses representam um complexo de doenças com uma importante diversidade clínica e epidemiológica. A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma zoonose endêmica no Brasil, anteriormente restrita a áreas rurais, mas, recentemente tem ocorrido expansão no processo de urbanização da Leishmaniose Visceral. A imunidade inata participa dos mecanismos de defesa contra a leishmânia e ainda está pouco compreendida na leishmaniose canina. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imunitária inata dos fagócitos de cães naturalmente infectados por Leishmania spp. em comparação com cães normais, pela avaliação da fagocitose e capacidade de produzir moléculas microbicidas. Foram utilizados 30 cães, sem raça definida, maiores que um ano de idade, sendo 22 cães machos e 8 fêmeas, que foram distribuídos em dois grupos: 15 cães não infectados utilizados como controle normal e 15 cães naturalmente infectados pela Leishmania spp. Foram feitos o exame clínico, o hemograma e os testes bioquímicos. Foram avaliadas a fagocitose de Saccharomyces cerevisiae pelos neutrófilos e monócitos do sangue periférico, pelos receptores para padrões moleculares de patógenos e pelos receptores para opsoninas. A produção de ânions superóxido foi avaliada pelo teste do NBT, a produção de peróxido de hidrogênio pela oxidação do vermelho neutro na presença de peroxidase e a produção de óxido nítrico foi quantificada pela presença de nitrito no sobrenadante das culturas utilizando reagente de Griess, estimuladas ou não com LPS. Os cães com leishmaniose apresentaram os seguintes sinais clínicos característicos da doença: alopecia (33%), descamação (46%), úlcera na pele (20%), onicogrifose (26%), caquexia (46%), linfoadenomegalia (40%), ceratoconjuntivite (53%). Os cães com leishmaniose apresentaram anemia normocrômica e normocítica, plaquetopenia e leucopenia, com neutrofilia relativa e desvio à esquerda. Os cães com leishmaniose apresentaram diminuição da atividade sérica da alanina aminotransferase (ALT) em relação a cães normais. Não foram observadas diferenças na concentração sérica da creatinina. As proteínas totais (PT) mostraram-se aumentadas em cães com leishmaniose as custas do aumento das globulinas, sendo que não houve diferença na concentração sérica de albumina entre cães com leishmaniose e cães normais. Cães com leishmaniose apresentaram menor capacidade fagocitária pelos neutrófilos do que cães normais quando avaliados pelos r eceptores para padrões moleculares de patógenos. A fagocitose facilitada por opsoninas mostrou que o número de leveduras ingeridas por neutrófilo foi maior em cães com leishmaniose em relação aos controles normais. Não houve diferença entre a capacidade fagocitária pelos monócitos de cães com leishmaniose e cães controle normal quando avaliados pelos receptores para padrões moleculares de patógenos, nas proporções de 5 ou 20 leveduras não sensibilizadas por monócito. Monócitos de cães com leishmaniose apresentaram maior capacidade fagocitária em comparação aos de cães normais, quando avaliados pelos receptores para opsoninas, tanto na proporção de 5 quanto na proporção de 20 leveduras sensibilizadas por monócito. A porcentagem de redução do NBT basal pelos fagócitos de cães com leishmaniose foi menor do que a dos cães controle. Quando utilizamos a concentração de 5 μg/mL de LPS, observamos que cães controles normais apresentaram um aumento da produção de óxido nítrico em relação aos cães controles normais. Entretanto, nos cães com leishmaniose houve diminuição na produção de óxido nítrico quando estimulados com 5 μg/mL de LPS em relação a sua produção basal. Observamos maior produção basal de peróxido de hidrogênio pelos cães com leishmaniose. Nossos resultados mostraram que há uma deficiência dos neutrófilos de cães com leishmaniose tanto na fagocitose quanto na produção de moléculas microbicidas, como os ânions superóxido. Entretanto, os monócitos desses cães embora apresentem uma maior capacidade fagocitária do que os cães normais, mostram uma menor capacidade de produzir óxido nítrico, que é uma das principais moléculas microbicidas para as leishmânias. Estas alterações do sistema imunitário inato podem favorecer o escape do parasito do sistema imunitário do hospedeiro, assim perpetuando sua sobrevivência. Ademais, o aumento da produção de peróxido de hidrogênio pelos monócitos, pode estar contribuindo para restringir em parte a multiplicação do parasito, mas o seu excesso pode também estar contribuindo nos mecanismos de imunopatogenia. Nossos dados contribuem para uma maior compreensão dos mecanismos de defesa da imunidade inata e da imunopatogenia da leishmaniose em cães e podem contribuir para a busca de novos alvos para drogas imunomoduladoras que possam auxiliar no tratamento contra a leishmaniose.