Estudo das infecções por hemoplasmas em cães e gatos domésticos

Abstract

Hemoplasmas são micoplasmas hemotrópicos que não possuem parede celular e crescem na superfície de eritrócitos podendo causar anemia infecciosa em diferentes espécies de mamíferos. Gatos são infectados por três espécies principais: Mycoplasma haemofelis (Mhf), ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ (CMhm) e ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ (CMt) e em cães as espécies Mycoplasma haemocanis (Mhc) e ‘Candidatus Mycoplasma haematoparvum’ (CMhp) são as mais prevalentes. O presente estudo teve como objetivos determinar a ocorrência e a filogenia das espécies de hemoplasmas em gatos da capital do Brasil e cidades satélites e de cães da Nigéria, África, e verificar se há correlação com alterações hematológicas. Amostras de sangue foram coletadas de 451 gatos de diferentes origens de Brasília, DF e de 246 cães de Jos, Plateau State, Nigeria e submetidas a avaliação eritrocitária e extração de DNA para PCRs e sequenciamento. No estudo em gatos, hemoplasmas foram encontrados em 13.8% dos animais. CMhm foi a espécie mais prevalente (13.8% dos gatos), seguida pelo Mhf (11.1%) e CMt (4.4%). Mais de 80% dos gatos infectados por hemoplasmas estavam infectados por duas ou mais espécies: 7.1% estavam co-infectados com Mhf/CMhm, 0,4% com CMhm/CMt e 3,9% com Mhf/CMhm/CMt. O gênero masculino estava significativamente associado com infecção por hemoplasmas. Nenhuma associação entre o resultado da qPCR para hemoplasmas e parâmetros hematológicos foi encontrada, porém o número relativo de cópias de CMhm apresentou correlação com o número de eritrócitos e hematócrito. As sequencias do gene 16S rRNA (>1Kb) das espécies de hemoplasmas provenientes de gatos com co-infecções foram obtidos usando oligonucleotídeos espécie específicos, o que permitiu a obtenção de sequencias do gene 16S rRNA apesar do alto nível de co-infecções, que impossibilita o uso de oligonucleotídeos universais para o gene 16S rRNA. Dentro de cada espécie as sequencias de Mhf, CMhm e CMt apresentaram identidade de >99.8%, >98.5% e >98.8%,respectivamente. As sequencias de Mhf, CMhm e CMt apresentaram >99.2%, >98.4% e >97.8% de identidade, respectivamente, com sequencias do GenBank. A análise filogenética demonstrou todas as sequencias do Mhf em um único grupo, enquanto as sequencias de CMhm e CMt se agruparam em 3 subgrupos distintos. Estes achados filogenéticos sugerem a existência de diferentes cepas de CMhm e CMt. No estudo em cães, a qPCR espécie específica detectou infecção por Mhc em 18 dos 245 cães (7,3%) e CMhp em apenas um cão (0,4%). A qPCR de gênero de hemoplasmas foi positiva em 44 dos 245 (17,9%) dos cães. Vinte e cinco cães tiveram resultados discordantes nas qPCRs, nos quais foram positivos na qPCR de gênero de hemoplasmas, mas negativos na qPCR espécie específica. A avaliação desses cães discordantes por meio do sequenciamento do gene 16S rRNA gerou resultados limitados, mas em 5 cães confirmou-se a infecção por espécies diferentes de hemoplasmas: 2 Anaplasma phagocytophilum, 1 Anaplasma ovis, 1 Serratia marcescens e 1 Aerococcus spp. O sequenciamento do gene 16S rRNA dos Mhc mostrou >99,8% de identidade entre elas e >99,6% de identidade com sequencias disponíveis no GenBank e permaneceram no mesmo grupo de outras sequencias de Mhc e Mycoplasma haemofelis, indicando baixa variabilidade genética do gene 16S rRNA entre Mhc de diferentes origens.