Detecção de células tumorais circulantes de câncer de mama pelo método cell block

Abstract

O câncer de mama é o mais incidente em mulheres, sendo que no mundo, mais de 1,5 milhão de novos casos são diagnosticados anualmente. A metástase é um processo invasivo, no qual as células tumorais deixam o seu sítio primário, passam a circular pelo organismo e podem colonizar novos órgãos. Esse processo e suas complicações respondem por mais de 90% das mortes em decorrência do câncer. Dessa maneira, buscam-se métodos mais eficientes não apenas para diagnosticar o câncer, mas também para fornecer um prognóstico aos pacientes quando o tumor já está instalado. As células tumorais circulantes (CTCs) são identificadas na circulação sanguínea e linfática de pacientes com metástase e sua detecção representa uma grande promessa clínica. Por serem originárias do tumor primário, as CTCs podem fornecer informações para o tratamento mesmo antes do surgimento de metástases, além de exercerem um papel importante no diagnóstico precoce e prognóstico da doença. Atualmente, um único método, não disponível no Brasil, encontra-se aprovado para prognóstico de pacientes metastáticos. O cell block vem sendo utilizado no preparo de diferentes amostras citológicas como efusões, lavado peritoneal, aspirados e amostras em meio líquido para a detecção de CTCs. A adição de plasma e tromboplastina à amostra para formação de coágulo é uma das formas de preparo do cell block, no entanto, existem poucos estudos com este método em amostras de sangue. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a possibilidade de detecção de células tumorais de câncer de mama no sangue periférico através do método plasma-tromboplastina no preparo de cell block. Para isso, foi utilizado um método de spike-in, no qual células de linhagens MCF7 e BT474 de câncer de mama foram adicionadas, em quantidades decrescentes (de 500.000 a 1.000), ao sangue periférico de doadores saudáveis para serem detectadas. Como comparação, foi utilizado o método de citocentrifugação. O cell block fixado em formol e incluído em parafina foi utilizado para a montagem dos cortes em lâminas histológicas. As lâminas provenientes da citocentrifugação foram imunomarcadas com anticorpo anti-Pan-CK enquanto as lâminas provenientes do cell block foram coradas com anticorpos anti Pan-CK, Epithelial related antigen, Claudin-4, receptor de estrogênio (RE) e GATA-3. As lâminas foram analisadas e as células positivas contadas. Além disso, amostras de 31 pacientes com câncer de mama foram coletadas e submetidas aos mesmos procedimentos descritos acima para as linhagens celulares. Na avaliação de células tumorais das linhagens MCF-7 e BT474, houve aumento de células imunomarcadas à medida que ocorreu aumento da concentração de células adicionadas inicialmente para os diferentes anticorpos, com destaque para a marcação de Pan-CK e epitelial related antigen, principalmente nas menores concentrações menores (1.000 a 10.000 células/7 mL). A recuperação de células na citocentrifugação e do cell block foi baixa, sendo a maior taxa de recuperação de 2,95 % para as lâminas feitas por citocentrifugação na concentração de 142,86 células/mL marcadas com Pan-CK. Nenhum dos casos era metastático e 42% deles estavam em estágio inicial. A idade média das pacientes com câncer de mama foi de 54 anos. O tipo histológico mais frequente foi o ductal (77,42%), sendo as invasões sanguínea ou linfática encontradas em apenas 7 casos (22,58%). Em 61,3% dos tumores (19 casos) havia expressão do receptor de estrogênio enquanto a expressão do receptor de progesterona ocorreu em 18 pacientes (58% dos casos). No entanto, não houve detecção de CTCs em amostras de sangue de quaisquer das pacientes do estudo, pelos métodos utilizados (citocentrifugação e cell block). Considerando-se que foi possível a detecção de células tumorais de linhagens, mesmo que em pequena quantidade, pelo método do cell block, conclui-se que ele poderá ser uma alternativa rápida e econômica para identificação de CTCs. A falta de identificação de CTCs nas amostras de pacientes pode ter ocorrido por diversos fatores, tais como, a avaliação de poucos cortes do cell block e o fato de que os tumores eram de estadiamento ainda inicial, que tem sido frequentemente associado a baixo número de CTCs em outros trabalhos. Espera-se que o uso de cell block possa ser um método alternativo e viável para a detecção de CTCs, pelo menos para os pacientes metastáticos, algo que ainda necessitará de confirmação.