Desenvolvimento de vetores virais para produção de proteínas recombinantes

Abstract

O uso de vetores virais vegetais para expressão transiente de proteínas heterólogas é uma ferramenta útil para produção em larga escala de biofármacos importantes como anticorpos e antígenos. Alguns grupos de vírus vegetais são amplamente utilizados para esta finalidade, como por exemplo tobamovirus, potexvirus, cucumovirus, entre outros. Neste estudo, foram desenvolvidos três vetores virais distintos. O tobamovirus Pepper mild mottle virus (PMMoV) foi utilizado para o desenvolvimento do primeiro vetor viral para a expressão de proteínas recombinantes, desse estudo. Inicialmente, o clone infeccioso de PMMoV foi construído no pequeno vetor binário pJL89, substituindo-se a parte central da capa proteica do vírus pelo gene repórter Green fluorescent protein (GFP), usando a técnica de Gibson Assembly. O vetor pJL_PMMoV(Δ)GFP fusionado mostrou-se viável para expressão do gene de GFP. Posteriormente, o gene de GFP foi substituído pelo gene de antígenos virais de Chikungunya virus (CHIKV) e o gene foi expresso com sucesso. No segundo trabalho, o clone infeccioso do tymovirus Tomato blistering mosaic virus – ToBMV foi adaptado para futuramente ser usado como vetor de apresentação de peptídeos. A região N-terminal da capa proteica foi modificada deletando-se 24 aminoácidos (CPΔ2-24) que mostraram-se não essenciais para a expressão do capsômero e infectividade. E, finalmente no terceiro estudo, um baculovírus recombinante foi construído para checar a montagem de tymovirus-like particles (tVLPs) após a expressão da CP do tipo selvagem ou uma versão contendo uma pequena deleção na região amino-terminal da CP (CPΔ2-24). À essa região foi adicionada uma pequena sequência contendo um epitopo de CHIKV para testar o potencial uso de ToBMV como uma proteína carreadora de epitopos imunogênicos. Dessa maneira, foi observada a formação de tVLPs em todas as versões da CP quando o gene foi expresso em células de inseto utilizando baculovírus.