Avaliação dos efeitos anti-inflamatórios de anticorpos recombinantes, produzidos por meio de um sistema de entrega de dna tendo a bactéria Lactococcus lactis como veículo, no tratamento da colite experimental

Abstract

Doença inflamatória intestinal (IBD), incluindo doença de Crohn (CD) e colite ulcerativa (UC), é caracterizada por uma inflamação crônica do trato gastrointestinal (GIT) e tem origem pouco conhecida. Assim, entender os mecanismos moleculares da patologia e desenvolver novos medicamentos é fundamental para o tratamento destas doenças. Nesse contexto, a citocina TNFa desempenha papel crucial na patogênese de IBD e é atualmente considerada o melhor alvo terapêutico. Entretanto, a via de administração intravenosa de imunoterapias convencionais causa imunogenicidade e efeitos colaterais sistêmicos. Para contornar estas limitações, a entrega local destes medicamentos poderia beneficiar os pacientes, restringindo a terapia no sítio inflamatório. Portanto, o desenvolvimento de linhagens de Lactococcus lactis capazes de entregar um vetor de expressão eucariótica que codifique um fragmento variável de cadeia única (scFv) de anticorpo representa uma nova estratégia para a elaboração de uma terapia alternativa mais efetiva para expressão diretamente no intestino, contra UC. Logo, dois vetores derivados de pValac que codificam dois scFv foram construídos para produção de anti-TNFa e de anti-IL1b e foram testados no modelo de colite induzida por DSS, em camundongos. Após mostrar que os dois vetores eram capazes de induzir a síntese dos anticorpos por cultura de células animais HEK-293, os plasmídeos foram introduzidos em L. lactis MG1363 FnBPA+ para serem testados no modelo in vivo com camundongos C57BL/6. Após 4 dias de tratamento, a administração oral de L. lactis MG1363 FnBPA+ (pValac::anti-TNFa), mas não de L. lactis MG1363 FnBPA+ (pValac::anti-IL1b), se mostrou capaz de melhorar os parâmetros macroscópicos e histológicos da colite. Além disso, os animais tratados apresentaram níveis dos transcritos de mRNA de IL-6, IL17A, IL1b, IL10 e Foxp3 semelhantes aos animais saudáveis. Portanto, marcadores moleculares e morfológicos sugerem melhora da colite induzida experimentalmente. Assim, este estudo fornece evidências para o uso deste sistema alternativo de entrega de biofarmacêuticos in loco para o tratamento de IBD, pavimentando o caminho para uma nova rota biotecnológica de baixo custo e direcionada ao sítio de inflamação para o tratamento de doenças inflamatórias.