Obtenção dos ligantes à oligopeptidase B de trypanosoma cruzi

Abstract

A oligopeptidase B foi primeiramente isolada de Escherichia coli, sua distribuição é restrita a bactérias Gram-negativas e positivas, eucariotos inferiores e plantas e não possui ortólogos em mamíferos, característica importante quando se pensa nesta protease como alvo de droga. Já foi demonstrado que a oligopeptidase B de Trypanosoma cruzi (OPBTc) participa do processo de infecção do parasito e tem sido cada vez mais mencionada como um importante fator de virulência para os tripanossomatídeos.. A identificação de substâncias com desempenho comprovado na OPBTc pode servir como molde para o desenho racional de inibidores mais eficazes e seguros, e portanto, com maior possibilidade de sucesso terapêutico. O presente projeto tem como objetivo geral obter os ligantes à oligopeptidase B de Trypanosoma cruzi com a finalidade de construir seu interatoma, e como objetivos específicos aprimorar as técnicas de identificação de ligantes. Para obtenção dos ligantes foram utilizadas várias metodologias, como a técnica de cromatografia por afinidade, pull-down, técnicas utilizando o cross-linking e o BN-PAGE, mostrando as diferenças e vantagens entre cada metodologia. No experimento de BN-PAGE demonstramos o padrão de migração da OPBTc recombinante e nativo, mostrando pela primeira vez a OPBTc como um dímero (160 kDa) em uma técnica eletroforética. Nos experimentos foi possível visualizar a presença de alguns possíveis complexos, que precisam ser levados para identificação e confirmação da funcionalidade desses complexos no processo de infecção do parasito ao hospedeiro, que poderá ser feito futuramente. Como perspectiva, posteriormente os ligantes/complexos da OPBTc poderão ser identificados pela técnica de espectrometria de massa e melhor estudados para a compreensão de como eles atuam na interação parasito-hospedeiro.