Acurácia da qPCR associada ao cultivo no meio Novy-MacNeal-Nicolle no diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana

Abstract

FUNDAMENTOS: A sensibilidade dos métodos de cultura em meio sólido para o diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana (LTA) é limitada pela capacidade visual do avaliador. OBJETIVO: Neste trabalho, foi testada a acurácia da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) baseada em ensaios com sonda de hidrólise TaqMan acoplada à cultura em meio Novy-MacNeal-Nicolle (NNN) modificado para o diagnóstico de LTA. MÉTODOS: Pacientes com apresentação clínica compatível com LTA foram alocados nos grupos controle e grupo LTA. Foram comparadas a acurácia da avaliação microscópica da cultura e da qPCR de aspirados de lesões cultivados. Os ensaios quantitativos e qualitativos foram realizados utilizando uma sonda de hidrólise específica e primers que amplificam o kDNA de Leishmania braziliensis. RESULTADOS: Cinquenta e oito pacientes foram incluídos no estudo, sendo 38 no grupo LTA e 20 no grupo controle. A análise combinada da qPCR + cultura melhorou significativamente a acurácia do diagnóstico em comparação com a análise visual microscópica (p = 0,006). Ao comparar a avaliação microscópica e a qPCR + cultura, foi observado um ganho de sensibilidade de 44.7% (17 de 38 pacientes com LTA; IC 95% = 28,6 - 61.7) para 68.4% (26 de 38 pacientes com LTA; IC 95% = 51.3 - 82.5), com uma pequena redução de especificidade de 100% (20 de 20 controles; 95% IC = 83.2 - 100) para 95% (19 de 20 controles; 95% IC = 75.1 - 99.9), respectivamente. A quantidade mínima de parasitos por tubo de cultura detectada por microscopia foi de 15. Entretanto, a sensibilidade foi de apenas 30% quando menos de 1.000 parasitos foram quantificados. CONCLUSÃO: A avaliação microscópica das amostras de cultura na LTA pode ter sua sensibilidade limitada pela não visualização de parasitos escassos ou pela não diferenciação de parasitos amastigotas em formas promastigotas.