Caracterização e potencial imunomodulatório de vesículas extracelulares de células dendríticas tratadas com catelicidina LL-37

Abstract

As vesículas extracelulares (VEs) derivadas de células dendríticas (DCs) têm atraído atenção pela sua atividade na indução de repostas imunológicas específicas. Essas nanomoléculas secretadas por diferentes tipos celulares, em particular aquelas derivadas de DCs, são delimitadas por bicamada lipídica e estão relacionadas com a apresentação antigênica aos linfócitos T por meio da expressão de MHC e moléculas coestimulatórias em sua superfície vesicular. Durante o seu desenvolvimento, as DCs imaturas sofrem estímulos que influenciam no seu estado de maturação, tais como citocinas e peptídeos antimicrobianos. A catelicidina LL-37 é um peptídeo antimicrobiano predominante em ambientes inflamatórios e com capacidade imunomodulatória, incluindo a de promover a plasticidade do estado de diferenciação de DCs. Entretanto, não há relato na literatura se o estímulo da LL-37 sob as DCs reflete no perfil de VEs secretadas por essas células. Nesse sentido, o objetivo do presente estudo foi caracterizar funcionalmente VEs derivadas de DCs induzidas por LL-37. Inicialmente, as DCs foram obtidas a partir da medula óssea de camundongos (BMDCs), expostas com LL-37, durante e após a sua diferenciação, para a verificação da sua atividade funcional por meio da dosagem das citocinas TNF-α, IL-6, IL-12p70, IL-10, IL-1β e a quimiocina CCL2, por teste imunoenzimático ELISA. As VEs (VE-LL-37) foram então, obtidas do sobrenadante das culturas celulares das BMDCs e purificadas por ultracentrifugação diferencial e, em seguida caracterizadas quanto ao tamanho e distribuição, por técnica de resistência de pulso (tRPS) e quanto a morfologia, por microscopia eletrônica (MET). Inicialmente, as VE-LL-37 induziram a produção de citocinas, incluindo a IL-12, tanto em DCs como em macrófagos. Além disso, a interação dessas VEs com linfócitos T alogênicos levou a ativação MHC-dependente dessas células com produção de IFN-γ, sugestivo de fenótipo T1. Na reação mista de leucócitos utilizando o modelo de infecção in vitro de BMDCs por Paracoccidioides brasiliensis, o tratamento desses fagócitos com VE-LL-37 levou a reversão de um perfil T2, induzido pelo fungo, para T1. Finalmente, utilizando macrófagos infectados pelo P. brasiliensis verificamos, ao avaliar a viabilidade fúngica, a produção de NO- e TNF-α, que as VEs não têm a capacidade de modular as células infectadas. Os achados preliminares nesse estudo contribuem para a compreensão dos efeitos imunomodulatórios, na produção de citocinas e indução da resposta predominante T1, pelos quais as VEs derivadas de DCs estimuladas por LL-37 influenciam as respostas imune inata e adaptativa, abrindo novas possibilidades do uso de VEs no controle das respostas imunológicas, seja como terapia ou adjuvante em tratamentos imunomoduladores.