Extrato etanólico de plantas do cerrado na produção in vitro de embriões bovinos

Abstract

O cultivo in vitro induz uma produção excessiva de espécies reativas de oxigênio (ERO), que afeta a produção e qualidade dos embriões. Compostos antioxidantes sintéticos já foram utilizados para minimizar os efeitos deletérios do estresse oxidativo em embriões produzidos in vitro (PIVE) e, consequentemente, melhorar sua qualidade e criotolerância. Entretanto, a demanda para o uso por antioxidantes mais eficientes, estáveis, com propriedades relativamente seguras e não tóxicas é crescente entre os grupos de pesquisa. Portanto, o presente estudo avaliou o efeito de extratos etanólicos obtidos de folhas de plantas do cerrado, ricos em polifenóis, no cultivo de embriões bovinos. Quatro experimentos foram conduzidos para validar um extrato etanólico capaz de minimizar os efeitos adversos do estresse oxidativo e melhorar a qualidade embrionária. Em um primeiro momento, comparou-se o extrato etanólico de folhas secas de cinco plantas e selecionou-se as duas com a maior capacidade antioxidante e com o maior teor de compostos fenólicos. Após essa etapa, foi determinada a melhor concentração dos extratos etanólicos de cagaita (Eugenia dysenterica) e murici (Byrsonima crassifólia), a ser utilizada durante o cultivo in vitro, na produção e qualidade embrionária e na taxa de apoptose. Então, avaliou-se a influência da suplementação dos extratos na produção de ERO, de glutationa (GSH) e na abundância de transcritos de genes relacionados à apoptose e ao metabolismo de ERO de blastocistos expandidos. Finalmente, foi avaliado o efeito da suplementação dos extratos etanólicos de folhas secas de cagaita e murici, durante o cultivo embrionário, na criotolerância dos blastocistos expandidos. Os resultados obtidos demonstraram uma redução (p<0,05) na proporção de células apoptóticas de embriões cultivados com 0,01mg/mL de extrato etanólico de cagaita, além de induzir um aumento nos níveis de transcritos de GPX4 e PRDX3. O extrato etanólico de murici também induziu um aumento na abundância de transcritos desses genes mas não reduziu a proporção de células apoptóticas. Além disso, os blastocistos expandidos cultivados com os extratos, na concentração de 0,01mg/mL e criopreservados, pelo método de transferência direta, obtiveram taxas de eclosão maiores e de degeneração menores (p<0,05) quando comparados ao grupo congelado sem a suplementação prévia com os extratos. Ainda, a taxa de apoptose dos embriões cultivados por 12 horas após a criopreservação foi menor (p<0,05) nos grupos previamente expostos aos extratos durante o cultivo in vitro. Conclui-se que tais extratos podem ser uma alternativa para aumentar a criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro.