Identificação de espécies de Fusarium patogênicas ao grão de bico e indução de genes relacionados a defesa com o uso de extrato de Rhizobium tropici.

Abstract

A murcha vascular causada por fungos do complexo de espécies Fusarium oxysporum (FOSC) e a podridão negra das raízes causada pelo complexo de espécies Fusarium solani (FSSC) são algumas das principais doenças que reduzem a produção do grão de bico. O controle dessas doenças tem sido difícil, devido a variabilidade genética e a ampla gama de hospedeiros do patógeno. Portanto, o objetivo deste trabalho foi estudar a variabilidade genética das espécies de Fusarium que afetam o grão de bico cultivado em Goiás e no Distrito Federal, além de avaliar a indução de genes de defesa em plantas de grão de bico submetidas ao tratamento com extrato de Rhizobium tropici (ERT). Isolados de Fusarium foram obtidos a partir de raízes de plantas de grão de bico apresentando sintomas de murcha, amarelecimento e podridão negra das raízes. A partir dessas culturas, precedeu-se a caracterização morfológica no meio de cultura SNA e BDA. Para a identificação molecular, foi realizada a extração de DNA, seguida de amplificação de uma região parcial do gene Rpb2, purificação dos fragmentos e o subsequente sequenciamento. Os resultados demostraram variações nas características culturais e morfológicas entre os isolados. As análises filogenéticas mostraram que a maioria dos isolados do FOSC agruparam com outras espécies de Fusarium que são patogênicas a soja, feijão, algodão, banana, entre outras, enquanto que os isolados do FSSC foram agrupados com Fusarium falciforme em um único clado. Embora a identificação precisa não tenha sido possível usando apenas um gene, os resultados indicam a presença de dois complexos de espécies. Visando desenvolver metodologias para auxiliar no controle das doenças causadas por FOSC e FSSC, foi verificada a indução de genes de defesa na planta após tratamento com ERT. Raízes de grão de bico cv. Cícero foram coletadas 24 h e 48 h após a aplicação de ERT e comparadas a plantas inoculadas com água. Posteriormente, as amostras das raízes foram utilizadas para a purificação de RNA total, seguido do tratamento com DNAse para a síntese do cDNA. Os resultados obtidos mostraram que em 24 h os genes que codificam as proteínas LOX 1, DOX 1, CAT 4, PER 10 e PAL 2 tiveram a expressão regulada positivamente quando comparados ao controle. Em 48 h a expressão dos genes que codificam as proteínas LOX 1, PER 10 foi maior estatisticamente quando comparada ao tempo de 24 h, enquanto que os demais genes mantiveram o nível de expressão. Estes resultados sugerem que o ERT foi eficiente na indução da maioria dos genes de defesa avaliados, podendo ser uma alternativa para auxiliar no controle de doenças em plantas.