Genotipificação de Staphylococcus aureus isolados de queijo minas frescal e leite de bovinos com mastite subclínica

Abstract

Espécies do gênero Staphylococcus são bactérias oportunista presentes na microbiota normal de mamíferos e causa mastite bovina. Representa na área de qualidade de alimentos um risco a saúde pública por estar envolvido em surtos de intoxicação alimentar, pela presença dos genes de enterotoxinas e resistência aos antimicrobianos. O objetivo deste trabalho foi genotipificar Staphylococcus aureus oriundos do leite de vacas com mastite subclínica e queijo do tipo minas frescal fracionado, obtidas na região do Distrito Federal, Brasil. As amostras de queijo foram isoladas em Baird Parker, em seguida, colônias selecionadas foram identificadas a partir dos testes bioquímicos. Cepas caracterizadas como Staphylococcus coagulase positiva seguiram para análise molecular e antibiograma. As amostras de S. aureus do leite mastítico utilizadas foram do banco de germoplasma do laboratório de microbiologia clínica veterinária da UNB. Após extração do DNA total, foi executada a PCR com primers: espécie-específico AroA, enterotoxinas SEA, SEC e SEE, e resistência MecA. Dentre o grupo amostral de 134 queijos coletados, 54 amostras foram detectadas a presença de Staphylococcus coagulase positivas, e após PCR do gene AroA espécie específico foram identificados 38 S. aureus. Das estirpes do leite mastítico bovino foram caracterizados 55 S. aureus. A eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) foi realizada em 21 linhagens selecionadas aleatoriamente, sendo 18/38 de linhagens do queijo e 3/55 da linhagem do leite mastítico. Todas as cepas foram positivas para os genes AroA e CoA (93). Foi detectada a predominância do gene COA de 600pb nas linhagens oriundas do leite (33/55) e do queijo (16/38). Observou-se a presença de enterotoxina estafilocócica em 16 (SEA), 4 (SEC) e 16 (SEE) isolados de S. aureus no leite; e 6 (SEA), 2 (SEC) e 2 (SEE) em isolados de queijo. Dentre os queijos avaliados foi encontrado um predomínio de cepas enterotoxigênicas na região Guará (Central Adjacente) (4/10) e no ponto de venda informal (7/10). Um isolado de S. aureus do estudo foi identificado o gene MecA (MRSA), originária do queijo de São Sebastião (Leste) comercializado em uma casa de frios. Trinta e seis (36/38) S.aureus isolados do queijo apresentaram resistência a droga ceftazidima. Na análise PFGE, foram detectados 19 perfis, todas com similaridade genotípica acima de 70%. Foram encontrados 2 clones, um entre cepas originária do leite e queijo e outro do queijo de diferentes regiões. A correspondência genotípica analisada entre as linhagens estudadas sugere contaminação de origem animal, e a manutenção das mesmas linhagens através da cadeia produtiva a partir da matéria-prima. Este resultado implica provável falha de pasteurização e manuseio no processo produtivo, reforçando a necessidade de melhores medidas de controle de higiene alimentar.