Produção de proteínas salivares de triatomíneo utilizando sistemas de expressão procarioto e eucarioto.

Abstract

O Rhodnius neglectus é um inseto hematófago, sendo vetor da doença de Chagas tendo a sua ampla distribuição no cerrado. Para garantir o sucesso do repasto sanguíneo, esses insetos possuem algumas estratégias para contrapor o sistema hemostático do hospedeiro. Desta forma, na saliva desses animais podem ser encontradas moléculas farmacologicamente ativas, como anticoagulantes, antiplaquetárias e vasodilatadoras. O objetivo desse trabalho foi produzir proteínas salivares de R. neglectus em sistemas heterólogos procarioto e eucarioto e avaliar sua capacidade para inibir a coagulação sanguínea. Desta forma, foram selecionados 4 transcritos do transcritoma de R. neglectus, os quais foram clonados no vetor pET100/D-TOPO® ou pFastBac1TM. O inibidor de serino protease do tipo Kazal (RnKazalSPI) foi expresso tanto em sistema procarioto, sendo identificado apenas na fração solúvel, quanto em eucarioto, porém neste último foi possível detectar sua expressão, por western blot, na linhagem Tn5B. Uma serino protease do tipo tripsina (RnTrypsin) também foi expressa em sistema eucarioto. A proteína de ligação a odorantes (RnOBP) foi expressa em ambas as frações bacterianas, porém ainda não foi possível purificar a proteína da fração solúvel. A triabina (RnTriabin), embora também tenha sido detectada em ambas as frações bacterianas, foi purificada a partir de corpos de inclusão. Das quatro proteínas, duas (RnKazalSPI e RnTriabin) foram efetivamente expressas em bactérias, purificadas e testadas quanto à sua capacidade para inibir a coagulação sanguínea. Entretanto, não apresentaram atividade anticoagulante nos ensaios realizados.