Estudo do efeito da metformina nas vias de sinalização relacionadas à sobrevivência e proliferação celular em linhagens de Feocromocitoma

Abstract

Os feocromocitomas são tumores neuroendócrinos raros, derivados de células cromafins que se localizam na medula das glândulas adrenais, sendo responsáveis pelo armazenamento, síntese e secreção de catecolaminas. Pacientes acometidos por este tipo de tumor apresentam alto risco de doenças cardiovasculares e as opções terapêuticas são pouco efetivas. Pensando nisso, o objetivo desse estudo foi investigar o efeito da metformina nas vias de sinalização relacionadas à sobrevivência e proliferação celular em linhagens celulares de feocromocitoma. Os métodos selecionados para este estudo foram: viabilidade das células de feocromocitoma, por MTT, exclusão por azul de tripan; ensaio de proliferação das células de feocromocitoma com incorporação de BrDu; coloração com cristal de violeta. Ensaio de western blot para avaliar: caspase 3, via de proliferação celular AMPK/ PTEN/AKT/mTOR/p70S6K/HIF1α e inibição do proteassoma em células de feocromocitoma de ratos; Ensaio de expressão dos genes: isoformas da HIF, VEGFA e VEGFR, ADM e ANGP em cultura primária de feocromocitoma; Imunofluorescência para KI-67, DAPI e DRP-1; Ensaio de peroxidação lipídica; ensaio de respiração celular. Os resultados mostraram que o sunitinibe (fármaco padrão) e a metformina reduzem a viabilidade das células de fibroblasto em 60% pelo método de MTT, mas não altera pelo ensaio de azul de tripan, em contrapartida, nas células de feocromocitoma, a viabilidade é reduzida em aproximadamente 50% e 60%, respectivamente. A redução da proliferação chega a 40% tanto com sunitinibe quanto com metformina nas células de feocromocitoma. A metformina parece alterar a viabilidade das células tumorais com efeito agudo. A clivagem da caspase 3 e a modificação da via AMPK/PTEN/AKT/mTOR/p70S6K/HIF1α, ocorreu apenas quando as células foram tratadas com metformina. Tanto a metformina quanto o sunitinibe promovem alterações nucleares que sugerem apoptose. A metformina só altera a expressão do gene VEGFR e induz a degradação da HIF pelo proteassoma das células de feocromocitoma. Metformina modifica a dinâmica mitocondrial de células silenciadas para o gene VHL via Drp-1. Os resultados sugerem que a metformina induz a peroxidação lipídica, inibe e altera todos os parâmetros da respiração celular e, em concetrações baixas reduz a respiração de células silenciadas para os genes VHL e SDHB. Como conclusão, os resultados deste estudo sugerem que a metformina: a. regular a viabilidade de células de feocromocitoma e de fibroblastos de pele humana, mas esse efeito seletivo ocorre em condições agudas; b. induz a apoptose celular via caspase 3 e inibe a proliferação celular via AMPK/PTEN/AKT/mTOR/p70S6K/HIF1α; a metformina não modifica a via AMPK/PTEN/AKT nas células da cultura primária, mas modifica mTOR/p70S6K/HIF1α; a metformina aumenta a degradação da HIF e diminui o recrutamento de DRP-1 pela mitocôndria de células de feocromocitoma; a metformina reduz o consumo de oxigênio nas células PC-12 Adh normais e silenciadas para os genes VHL e SBHB.