Efeito do secretoma de células mononucleares do sangue periférico sobre o imunoescape de um modelo in vitro de melanoma

Abstract

O melanoma é um tipo de câncer de pele derivado dos melanócitos, com alta taxa de mortalidade e mau prognóstico. Atualmente, várias abordagens imunoterapêuticas estão sob investigação para tratar o melanoma. No entanto, recidivas do câncer e respostas heterogêneas ainda são observadas clinicamente. Portanto, é essencial compreender melhor os mecanismos de imunoescape do melanoma e como esse câncer interage com a resposta imune para garantir o escape imunológico. Nesse trabalho, investigamos qual o impacto do microambiente inflamatório sobre o potencial da linhagem de melanoma metastático MeWo em controlar a resposta imune de células T. Para isso, inicialmente produzimos meios condicionados de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) em repouso (MC) e imunoativados com fitohemaglutinina (iMC). Em seguida, a MeWo foi expandida em RPMI, MC ou iMC e o secretoma gerado após a expansão celular foi coletado e identificado como Sec (RPMI), nSec (não inflamatório) ou iSec (secretoma inflamatório), respectivamente. A partir desse momento, submetemos as PBMCs ativadas com fitohemaglutinina ao Sec, nSec e iSec. Inicialmente, notamos que as células MeWO expostas ao iMC apresentaram expressão elevada de importantes moléculas imunomoduladoras, como PD-L1 e IDO. Além disso, essas células apresentaram aumento na expressão das ectoenzimas CD39 e CD73 em sua membrana, indicando maior potencial de gerar imunossupressão por produção de adenosina. Em adição, nossos dados revelaram que o iSec foi capaz de controlar significativamente a proliferação de células T e reduzir a expressão de marcadores clássicos de ativação como CD69 e HLA-II. Além disso, as PBMCs tratadas com iSec apresentaram expressão reduzida dos principais reguladores das respostas Th1, Th2 e Treg (Tbet e Gata-3 e FOXp3). De modo concordante, notamos expressão reduzida de IFNγ nessas células. Mais importante, as PBMCs cultivadas com iSec apresentaram expressão reduzida dos transcritos TIM-3 e LAG-3, que codificam alvos terapêuticos que têm sido investigados no melanoma. Como pode ser visto, a exposição das células tumorais ao ambiente inflamatório desempenha um papel importante para permitir que essas células atuem com uma função imunossupressora mais potente. Considerando que nosso estudo teve foco em investigar comunicação parácrina, seria importante o desenvolvimento de novas investigações de modo a fornecer um melhor entendimento dos mecanismos de imunoescape do melanoma, com uma abordagem que permita contato celular. Tais avanços são fundamentais para o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas focadas na imunoterapia do melanoma.