Análise proteômica e fosfoproteômica durante transição dimórfica em Paracoccidioides brasiliensis

Abstract

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica de alta incidência na América Latina, atribuída aos fungos termodimórficos do gênero Paracoccidioides. O contato com o hospedeiro ocorre através da inalação de conídios, que alcançam os alvéolos pulmonares e se diferenciam em leveduras. Esta etapa de transição é considerada vital na patogênese da PCM, permitindo a sobrevivência do fungo no hospedeiro. Assim, este estudo procurou identificar proteínas envolvidas nas fases miceliana e leveduriforme e na transição morfológica micélio-levedura de Paracoccidioides brasiliensis. Os peptídeos marcados com iTRAQ foram identificados por LC-MS / MS. Esta abordagem permitiu a identificação de 312 proteínas diferencialmente expressas em micélio, levedura e transição micélio-levedura. Na batalha contra o fungo, o hospedeiro desenvolve várias estratégias para eliminar o patógeno e o fungo por sua vez, reprograma seu metabolismo para subverter as estratégias de defesa do hospedeiro. A fase parasitária de P. brasiliensis utiliza as vias de beta-oxidação, TCA e cadeia transportadora de elétrons e fosforilação oxidativa para a produção de ATP. Na fase leveduriforme há a indução de fatores de virulência e proteínas de choque térmico que permitem que o fungo se adapte ao aumento na temperatura. Por outro lado, as enzimas reguladas positivamente da fase miceliana se relacionam com a fermentação alcoólica. Além disso, vias como o ciclo celular, a transcrição e o metabolismo da parede celular foram regulados em micélio. Após marcação com iTRAQ, uma alíquota foi submetida a enriquecimento dos fosfopeptídeos com TiO2, seguido da identificação das proteínas por LC-MS / MS. O total de 72 e 23 fosfoproteínas foi identificado na fração enriquecida com TiO2 e fração global, respectivamente. Fosfoproteínas foram diferencialmente acumuladas nas fases do fungo.