Efeitos da senescencia na resposta imune de células pulpares humanas

Abstract

A senescência celular é um estado celular decorrente do envelhecimento e estresse crônico caracterizado principalmente por um estado permanente de parada do ciclo celular. Evidências indicam que a senescência pode afetar funções importantes como capacidade de defesa e reparo da polpa dentária, funções primordiais em tratamentos endodônticos conservadores. Esse trabalho objetivou avaliar as possíveis alterações morfológicas, além de alterações na capacidade migratória e proliferativa e efeitos na resposta imune de células da polpa dentária humana em estado de senescência. Inicialmente, as células foram tratadas com doxorrubicina para indução da senescência e a confirmação da indução foi realizada por meio de coloração de β-galactosidase. Em seguida, as alterações morfológicas foram avaliadas por meio de microscopia eletrônica de varredura, a proliferação através da contagem das células não coradas pelo azul de tripano e a migração pelo método Scratch. As alterações na resposta imune foram avaliadas por meio da dosagem dos genes de citocinas pró inflamatórias fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e interleucina 6 (IL-6) e citocinas anti-inflamatórias fator de crescimento transformador beta 1 (TGF-β1) e interleucina 10 (IL-10) utilizando o ensaio de PCR. Para esse ensaio foi simulada uma situação de resposta inflamatória in vitro utilizando estímulos de lipopolissacarideo (LPS) e interferon-gama (IFN-γ). Todos os ensaios foram realizados em triplicata técnica e biológicas e os dados obtidos foram submetidos a posterior análise estatística. Os resultados demonstraram alterações na morfologia evidenciando um aumento em relação ao tamanho celular e uma diminuição no número de prolongamentos das células senescentes, em relação ao grupo não senescente; além de uma redução na capacidade proliferativa e migratória. Em adição, observou-se um aumento na expressão gênica das citocinas TNF-α e IL-6 e uma redução na expressão gênica de IL-10 e TGF-β1 por células senescentes em comparação com células saudáveis. Em suma, a senescência demonstrou afetar a morfologia celular, reduzir a capacidade proliferativa e migratória, além de evidenciar um aumento da expressão de genes relacionados a inflamação e redução nos genes anti-inflamatórios, sugerindo uma situação inflamatória exacerbada associada a imunossupressão. Desta forma, a senescência celular possivelmente é um estado que afeta o prognóstico de tratamentos endodônticos conservadores pois afeta funções celulares primordiais relacionadas a esse tratamento.