Efeito da conservação de ovários a baixas temperaturas na morfologia de ovócitos imaturos inclusos em folículos ovarianos primordiais suínos

Abstract

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a viabilidade de folículos primordiais suínos após período de hipotermia com ou sem cultivo in vitro. A baixa temperatura tem sido usada para reduzir o metabolismo celular e minimizar a degradação tecidual. Foram utilizados 4 ovários de 4 animais prépúberes oriundos de abatedouro. Como controle, pedaços de córtex ovariano foram fixados no abatedouro (Controle Abate) e no momento em que chegaram ao laboratório (Controle Lab). Como controle do cultivo, pedaços de córtex foram destinados ao cultivo in vitro assim que chegaram ao laboratório (Controle CIV). Os ovários foram transportados ao laboratório a 36-38ºC em no máximo 1 hora. No laboratório, pedaços de córtex ovariano foram dissecados e mantidos em solução salina estéril a 4ºC ou 20ºC por 6, 12 ou 18hs. Após o resfriamento de todas as amostras, em cada tratamento houve um fragmento do córtex que foi fixado e outro que foi submetido ao cultivo in vitro por duas horas e então fixado posteriormente. O cultivo in vitro foi realizado utilizando meio Waymouth suplementado com piruvato, glutamina, ITS, ácido ascórbico, antibióticos e soro fetal bovino, a 38ºC em atmosfera umidificada com 5% de CO2 em ar. A finalidade do cultivo in vitro de curta duração foi somente restabelecer a temperatura e o metabolismo celular, não havendo a intenção de promover crescimento, para que as células pudessem expressar morfologicamente possíveis danos moleculares que tenham sofrido durante o tratamento. Após a fixação, todas as amostras foram preparadas para histologia. Somente os folículos primordiais foram contados e classificados como morfologicamente normais (FMN) ou degenerados. Os tratamentos foram comparados entre si por ANOVA e teste de Scheffe’s. Nenhuma diferença significativa foi observada entre os tratamentos (P>0,05) sob análise de microscopia de luz. É possível preservar ovários suínos a 4ºC ou 20ºC por até 18h, mantendo alta porcentagem de folículos primordiais morfologicamente normais (FMN). Na maioria dos tratamentos pode ser notada uma tendência em aumentar a percentagem de FMN quando o cultivo in vitro foi realizado. O cultivo in vitro não mostrou danos submorfológicos que poderiam ter sido causados durante o período de resfriamento. Os resultados ultra-estruturais mostram que folículos primordiais em tecido ovariano mantido a 4ºC ou 20ºC por 18hs não apresentaram alterações ultra-estruturais que comprometessem sua viabilidade. Além disso, os tratamentos cultivados in vitro por 2h proporcionaram uma melhor integridade celular dos folículos primordiais suínos.