Determinação de fitocanabinoides em produtos de Cannabis Sativa l. por HPLC-DAD e avaliação dos seus efeitos embriotóxicos em zebrafish (Danio Rerio)

Abstract

A Cannabis sativa L. é uma das plantas mais versáteis utilizadas por diversas culturas ao redor do mundo. Como consequência da variabilidade da Cannabis, que pode ser afetada pela sua genética, condições de crescimento e coleta, se mostra desafiadora a pesquisa sobre essa planta e a padronização de medicamentos e produtos à base de Cannabis. Esse projeto de Mestrado teve como um dos objetivos a otimização de um método de cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por arranjo de fotodiodos (HPLC-DAD), visando identificar e quantificar fitocanabinoides minoritários e majoritários em óleos e extratos concentrados de Cannabis de produzidos no Brasil por associações de produtores. Além da otimização do método cromatográfico, o estudo visou investigar os efeitos embriotóxicos de 4 extratos quantificados, utilizando o zebrafish (Danio rerio) como modelo in vivo. Os resultados indicaram a eficácia do método otimizado na quantificação de oito canabinoides em 15 amostras diferentes. As curvas de calibração demonstraram boa linearidade, com um R2 superior a 0,999 para todos os analitos, e limites de detecção e quantificação satisfatórios. A avaliação comparativa do método proposto com método de referência demonstrou desvios padrão relativos no teor de canabinoides majoritários inferiores a 5% para 4 óleos de Cannabis. Os ensaios embriotóxicos indicaram CL50 (96 h) de 5,97, 5,63 6,24 e 1,17 mg L-1 para os extratos de quimiotipos de CBD, de Δ9-THC, balanceado de CBD e Δ9-THC e de CBG, respectivamente. Efeitos subletais, como atraso na eclosão dos ovos e alterações morfológicas também foram observados em todos os extratos avaliados. Dessa maneira, conclui-se que os resultados obtidos são promissores para a expansão da aplicação do método cromatográfico na determinação de fitocanabinoides em produtos de Cannabis produzidos por associações brasileiras, para atender a demanda de controle de qualidade. A compreensão dos efeitos toxicológicos de extratos complexos de Cannabis é crucial, especialmente no contexto do crescente uso medicinal da planta. Nesse trabalho foi avaliado, de forma pioneira, o efeito de embriotoxicidade de um extrato de Cannabis rico em CBG, canabinoide com crescente aplicação terapêutica, ressaltando a importância desses estudos.