Purificação parcial e caracterização da apirase salivar de Rhodnius prolixus

Abstract

A saliva do artrópode hematófago Rhodnius prolixus contém atividade apirásica (EC 3.6.1.5) que facilita a hematofagia inibindo a agregação plaquetária, no hospedeiro vertebrado, induzida por ADP. Este trabalho descreve a purificação de proteínas que representam membros da família das apirases da saliva de R. prolixus. O conteúdo das glândulas salivares foi injetado numa coluna Superdex 200 10/300 GL e eluída com o tampão (25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 150 mM NaCl, 5.0 mM CaCl2) no fluxo de 0,5 ml/min. Os picos eluídos foram monitorados a 280 nm em cromatografia líquida rápida de proteínas (FPLC). As frações contendo atividade foram reunidas e submetidas à cromatografia de afinidade (coluna Hi-Trap Blue-Sepharose). Após eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), as bandas foram visualizadas por coloração com nitrato de prata. O zimograma revelou bandas proteicas entre 60 e 130 kDa que exerceram atividade apirásica. Os resultados sugerem que pode ocorrer um arranjo oligomérico entre as apirases salivares de R. prolixus. As apirases purificadas da saliva de R.prolixus são capazes de clivar nucleotídeos di- e trifosfato de maneira cálcio dependente. A purificação destas enzimas permitirá a caracterização mais detalhada de sua relação estrutura/atividade.