Detecção de DNA de Leishmania spp. no sangue e em esperma de indivíduos residentes na região Amazônica

Abstract

A leishmaniose é uma zoonose transmitida por flebotomíneos e causada por várias espécies do gênero Leishmania. Na região Amazônica, em particular no estado do Pará, a doença de Chagas e as leishmanioses compartilham área de transmissão, o que leva frequentemente à presença de infecções mistas. A ocorrência dessas foi verificada em estudo prévio em população de chagásicos da Amazônia, identificando a presença de anticorpos anti-Leishmania spp. em 50% das amostras. No sêmen dos mesmos indivíduos, também foi detectado DNA do Trypanosoma cruzi, sugerindo a possibilidade de transmissão sexual. Com poucos relatos sobre a transmissão sexual das infecções causadas por tripanossomatídeos, a real importância epidemiológica dessa via de transmissão permanece desconhecida. Assim, o este estudo avaliou a presença de infecções mistas causadas por Leishmania spp. e T. cruzi, mediante a análise dos resultados obtidos no diagnóstico sorológico por ELISA e molecular por PCR ITS1, em uma população residente no estado do Pará. Além disso, foi realizada a pesquisa de DNA de Leishmania spp. em amostras de esperma dessa população. Os resultados sorológicos revelaram que 50/108 (46,29%) dos indivíduos apresentavam anticorpos específicos contra antígenos de Leishmania spp., enquanto que a reação de PCR foi positiva em somente 20/108 (18,51%) dos indivíduos testados, evidenciando uma clara discrepância de 27,78% entre os métodos de diagnóstico. O teste de PCR demonstrou-se mais eficiente para identificação dos indivíduos com infecção mista, já que o teste sorológico apresentou um elevado número de reações cruzadas. O método molecular também foi capaz de detectar DNA nuclear do parasito no esperma de 53,1% dos indivíduos. O sequenciamento dos produtos amplificados permitiu identificar as espécies L. amazonensis e L. infantum nas amostras, demonstrando que a possibilidade de transmissão sexual das leishmanioses necessita de estudos mais aprofundados. Nossos resultados reafirmam a necessidade de aprimorar as técnicas de diagnóstico utilizadas na rotina laboratorial e aponta a técnica de PCR como ferramenta promissora na identificação das infecções causadas por Leishmania spp. A pesquisa realizada apresenta informações relevantes sobre diagnóstico e vias de transmissão das leishmanioses na região Amazônica, que poderá favorecer o aprimoramento de medidas de controle, prevenção e assistência à população. __________________________________________________________________________ ABSTRACT

Leishmanias is is a zoonosis transmitted by sandflies and caused by various species of the genus Leishmania. In Amazon, particularly at Pará State, Chagas disease and leishmaniasis share a common transmission area, which often leads to mixed infections. This scenario was observed in a previous study in a chagasic population of Amazon, which demonstrated the presence of anti-Leishmania spp. antibodies in almost 50% of the samples. Furthermore, itwas detected Trypanosoma cruzi DNA in semen from infected people, suggesting the possibility of sexual transmission of the parasite. There are few reports regarding the sexual transmission of infections caused by trypanosomatids and the actual epidemiologic alimportance of this transmission route remains unknown. Thus, the present study aimed to evaluate the presence of mixed infections caused by Leishmania spp. and T. cruzi byserological ELISA and molecular diagnosis PCR LITSR, in an endemic population at ParáState. Moreover, Leishmania spp. DNA search was carried out in sperm samples of this population. The results of serological tests revealed that 50/108 (46,29%) individuals hadspecific antibodies against Leishmania spp. antigens, whereas PCR was positive in only20/108 (18,51%) of tested samples, showing a clear discrepancy 27,78% between these methods. The study showed PCR was more efficient to identify individuals with mixedinfection, since serological assay showed a large number of cross-reactions. Molecularmethod was able to detect parasite nuclear DNA in semen from 53.1% individuals.Amplicons sequencing allowed us to identify the species L. amazonensis and L. infantum insamples, demonstrating the possibility of leishmaniasis sexual transmission needs to befurther investigated. Our results reaffirm the requirement of improve diagnostic techniquescurrently used in routine, and PCR arises as a promising tool for identification of infectionscaused by Leishmania spp. The study presented relevant information about diagnosis andleishmaniasis transmission routes at the Amazon region, which may favor the improvement of control measures, prevention and population care.