Trichoderma spp. como agentes de biocontrole de Cylindrocladium

Abstract

Um breve levantamento de patógenos foliares em área de produção comercial de mudas de eucalipto em um viveiro comercial de eucalipto no município de Luziânia (GO) revelou a ocorrência de cinco patógenos: C. scoparium, Pleospora sp., Hainesia sp., Pestalotiopsis sp. e Rhizoctonia solani (Capítulo I). Dentre esses patógenos de eucalipto (Eucalyptus sp.), destaca-se a mancha foliar causada pelo Cylindrocladium spp. Morgam (Teleomorfo: Calonectria sp. De Not). Esta enfermidade é especialmente importante em viveiros para a produção de mudas de eucaliptos, especialmente na clonagem de híbridos da espécie. O controle da doença tem sido baseado, principalmente, no tratamento das plantas com a aplicação de fungicidas em todos os estágios da clonagem do eucalipto. No capitulo II, foram testados os meios de cultura líquidas SG (Sacarose-Glicose), BD (Batata-Dextrose) e SDY (Extrato de levedura) para a produção de esporos de C. scoparium. O meio liquido SG possibilitou a produção de conídios dos dois isolados do patógeno que se mostraram infectivos em folhas de eucalipto. Para elaborar um programa de controle biológico contra doenças de plantas, é necessária seleção de antagonistas bem adaptados com alto grau de controle contra os fitopatógenos e, preferencialmente, que promovam o crescimento e enraizamento das miniestacas. Neste trabalho foram selecionados cinco isolados de Trichoderma por meio de testes in vitro e in vivo, foi avaliado o controle biológico de dois isolados de Cylindrocladium scoparium em folhas destacadas, a habilidade dos isolados do antagonista como produtores do hormônio de crescimento ácido Indolacético (AIA) e quanto à capacidade de colonização endofítica, em mudas de clones híbridos (G-100) de eucalipto. Estudou-se a promoção de crescimento e enraizamento de mudas de Eucalyptus urophillla obtidas por sementes e no híbrido G-100 (Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophilla) obtido por clonagem. Também foi estudada a capacidade de esporulação dos isolados de Trichoderma em dois substratos sólidos: grãos de arroz parboilizado de milheto. Os experimentos in vitro consistiram em pareamento de colônias e exposição do patógeno a metabólitos voláteis e não voláteis produzidos por Trichoderma spp. Observaram-se alterações morfológicas em hifas e inibição no crescimento micelial de C. scoparium. Em folhas destacadas de eucalipto, os cinco isolados de Trichoderma conferiram proteção contra a doença, sendo que o isolado CEN 517 de C. scoparium mostrou-se mais agressivo comparado ao CEN 494 de C. scoparium, quando quantificados os níveis de incidência da mancha foliar. Os dados obtidos na esporulação dos antagonistas em arroz parboilizado e milheto revelaram grande variação entre esses isolados. O isolado CEN 262 (T. harzianum) apresentou maior produção de esporos em ambos os substratos, aos 07 e 11 dias de incubação (capítulo III). Nos experimentos para a avaliação da promoção de crescimento,utilizando cinco isolados de Trichoderma selecionados nos ensaios de laboratório, o isolado CEN 262 apresentou um incremento significativo da matéria seca das raízes, da parte aérea e da altura das mudas. In vitro, constatou-se a produção de AIA pelos seguintes isolados: CEN 209, CEN 500 e CEN 262. O isolado CEN 262 apresentou concentração do hormônio 19 vezes maior que o CEN 209. Os isolados CEN 162, CEN 262, CEN 498 demonstraram capacidade de colonizar raízes de eucalipto (capítulo IV). _________________________________________________________________________________ ABSTRACT

A brief survey of leaf pathogens in a commercial production area of eucalyptus seedlings in a commercial nursery in the municipality of Luziânia (GO) showed the occurrence of five pathogens: C. scoparium, Pleospora sp., Hainesia sp., Pestalotiopsis sp. and Rhizoctonia solani (Chapter I). Among these pathogens of eucalyptus (Eucalyptus spp.), leaf spot caused by Cylindrocladium spp. Morgam (Teleomorph: Calonectria sp. de Not) stands out. This disease is especially important in nurseries that produce eucalyptus seedlings, especially in the cloning of hybrid species. Control of the disease has been based mainly on treating plants with fungicides at all stages of eucalyptus cloning. In Chapter II, liquid culture media SG (Sucrose-Glucose), BD (Potato-Dextrose) and SDY (Yeast extract) were tested to produce spores of C. scoparium. The SG liquid medium enabled the production of conidia of two pathogen isolates, which were showed to be infective in eucalyptus leaves. To draw up a biological control program against plant diseases, it is necessary and appropriate to select well adapted antagonists with a high degree of control against the plant pathogens and, preferably, to promote growth and rooting of the minicuttings. In this study five isolates of Trichoderma were selected through in vitro and in vivo tests. The biological control of two isolates of Cylindrocladium scoparium in detached leaves was evaluated, as well as the ability of the antagonist isolates to produce indoleacetic acid (IAA) growth hormone and for endophytic colonization in seedlings of hybrid clones (G-100) of eucalyptus. The promotion of plant and root growth was studied in Eucalyptus urophillla seedlings obtained from seeds and in the hybrid G-100 (Eucalyptus urophilla x Eucalyptus grandis) obtained by cloning. The capacity of Trichoderma isolates to sporulate in two solid substrates, grains of parboiled rice and millet, was also studied. The in vitro experiments consisted of pairing colonies and exposing the pathogen to volatile and non-volatile metabolites produced by Trichoderma spp. Morphological changes were observed in hyphae and inhibition of micelial growth of C. scoparium. On detached eucalyptus leaves, the five Trichoderma isolates gave protection against the disease, and isolate CEN 517 of C. scoparium proved to be more aggressive than CEN 494 of C. scoparium, when the levels of incidence of leaf spot were quantified.The results obtained for sporulation of antagonists in grains of parboiled rice and millet showed great variation between these isolates. The isolate CEN 262 (T. harzianum) showed higher production of spores in both substrates, at 07 and 11 days of incubation (Chapter III).In experiments to evaluate growth promotion, using five isolates of Trichoderma selected in laboratory tests, isolate CEN 262 (Trichoderma harzianum) showed a significant increase in dry roots, shoots and height of the seedlings. In vitro, the production of IAA was observed in the following isolates: CEN 209, CEN 500 and CEN 262. Isolate CEN 262 presented concentration of the hormone that was 19 times greater than that of CEN 209. CEN 162, CEN 262 and CEN 498 isolates demonstrated capacity to colonize roots of eucalyptus (Chapter IV).