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Título : Caracterização morfofuncional das células somáticas de folículo ovariano bovino, cultivado em meio de cultura definido, não indutor de luteinização
Autor : Vasconcelos, Rosângela Batista de
Orientador(es):: Silva, Alzira Amélia Martins Rosa e
Assunto:: Hemissecção folículo ovariano
Esteroidogênese
Biotecnologia
Bovino - reprodução
Fecha de publicación : jun-2008
Citación : VASCONCELOS, Rosângela Batista de. Caracterização morfofuncional das células somáticas de folículo ovariano bovino, cultivado em meio de cultura definido, não indutor de luteinização. 2008. 79 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas)-Universidade de Brasília, Brasília, 2008.
Resumen : Os efeitos dos hormônios gonadotrópicos sobre o desenvolvimento folicular já são bem caracterizados, no entanto, interações entre gonadotrofinas, esteróides e fatores de crescimento sobre os mecanismos intraovarianos envolvidos na regulação da foliculogênese e steroidogenesis ainda são pouco compreendidos. Neste sentido, o presente trabalho padroniza sistemas de cultivo com as células somáticas da parede do folículo, representado pela hemissecção da parede folicular, utilizando dois meios distintos: Um meio definido, aqui denominado ?-MEM e um meio indefinido, aqui denominado TCM. Os sistemas de cultura foram avaliados com relação à manutenção da atividade esteroidogênica, por dosagem dos hormônios estradiol e progesterona, expressão do RNAm da proteína StAR, enzimas da steroidogenesis, e receptor de FSH, aspectos morfológicos e imunomarcação para Cx43 nas hemissecções antes e após cultivo por 24 e 48 horas. Foram utilizados ovários de vacas abatidas em frigoríficos e transportados até o laboratório em solução salina à 37 ºC, dos quais foram dissecados folículos aparentemente saudáveis com 4 e 5 mm diâmetro. Os folículos foram seccionados ao meio para obter as hemissecções da parede do folículo, ou em três para obtenção das partes utilizadas na análise de RT-PCR. As secções do folículo foram cultivadas em meio 100ul do meio e incubadas em estufa a 37,5°C com 5% CO2 e 95% umidade por 24 ou 48 horas. Os Resultados mostram que os meios possuem capacidades de regulação distintas sobre a steroidogenesis folicular, características morfológicas e imunomarcação para Cx43. Os Sistemas de cultura com meio TCM apresentaram elevada concentração de P4 com 24 horas, e aumento progressivo da secreção deste hormônio no cultivo com 48 horas, redução da luminosidade das bandas das enzimas da steroidogenesis ( P450scc, arom, 17bHSD, 3bHSD) e do receptor do FSH após cultivo de 48 horas, além de alteração da morfologia celular a qual adquire forma semelhante a fibroblastos e perda da comunicação célula-célula evidenciada pela ausência da imunomarcação para Cx43 nas células foliculares; resultados que indicam luteinização celular, que podem ser decorrentes do uso do soro fetal bovino e elevadas concentração de FSH utilizado neste meio. Já os resultados obtidos para os sistemas de cultura que utilizaram o meio definido a-MEM puro ou acrescido de FSH em concentração fisiológica, mostra habilidade deste meio em manter atividade esteroidogênica ao longo do tempo de cultura, com menor secreção de P4 do que a obtida no meio indefinido, que não se altera ao longo da cultura, manutenção da expressão das enzimas da steroidogenesis após 48 horas de cultivo, além de conservar a característica morfológica das células semelhantes às obtidas in vivo e elevada expressão da proteína Cx43, resultados semelhantes àqueles obtidos com outros sistemas de cultivo livre de soro, e deixa evidente a capacidade do meio em manter as células foliculares in vitro com comportamento semelhante àquele de células de folículos saudáveis e em desenvolvimento. No meio a-MEM acrescido com FSH foi evidente o efeito estimulante sobre atividade esteroidogênica das células somáticas quando utilizado em dose fisiológica, por estimular a P450 aromatase e prevenir morte celular.
metadata.dc.description.unidade: Faculdade de Medicina (FMD)
Descripción : Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008.
metadata.dc.description.ppg: Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas
Aparece en las colecciones: Teses, dissertações e produtos pós-doutorado

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