Desenvolvimento de uma nanoformulação com alumínio-cloro-ftalocianina e paromomicina para tratamento da leishmaniose

Abstract

A leishmaniose é um problema de saúde pública em países em desenvolvimento. O tratamento dessa doença baseia-se principalmente no uso de antimoniais pentavalentes, em casos de falha terapêutica drogas como o Pentostam e a Anfotericina B tem sido utilizadas. Entretanto, a elevada toxicidade desses compostos e a geração de resistência a eles tem limitado o tratamento dessa doença, o que sugere o desenvolvimento de terapias mais efetivas. Por isso, realizou-se esta tese cujo objetivo principal consistiu no desenvolvimento de uma nanoformulação contendo o fotossensibilizante Alumínio-Cloro-Ftalocianina e o antibiótico Paromomicina para ser utilizada no tratamento da Leishmaniose Cutânea por meio de Terapia Fotodinâmica. A nanoemulsão O/A de AlClFt e Paromomicina foi preparada por meio do método de emulsificação espontânea, sendo que depois de caracterizada e ter a sua estabilidade determinada, o sistema de nanoemulsão foi testado quanto a capacidade de apresentar efeito antiparasitário em promastigotas, amastigotas intracelulares de L. braziliensis e células THP-1 diferenciadas, antes e depois da Terapia Fotodinâmica (5 joules/cm2) durante 24 horas; os resultados foram expressos como percentagens de inibição e concentração inibitória 50 e 90 (CI50, CI90) e como concentração citotóxica 50 e 90 (CC50 e CC90). Além disso, determinou-se ex vivo, em pele de camundongos Balb/c, a capacidade de permeação e de retenção dos sistemas de nanoemulsão mediante o sistema de células de Franz e tape stripping, respetivamente. Adicionalmente, camundongos Balb/c foram tratados topicamente na base da cauda com os nanoconjugados durante 15 dias usando terapia fotodinâmica, após de seis dias do término do tratamento; fígado, pele, baço e rim foram extraídos para a análise da biodistribuição da AlClFt e PM por espectrofluorometria e cromatografia líquida de alto desempenho, respetivamente. Além disso, medula óssea dos camundongos foi analisada para avaliação de formação de micronúcleos nos eritrócitos policromatófilos; sangue intracardíaca foi extraído para análise hemograma. Os resultados mostraram sistemas de nanoemulsão O/A com diâmetros hidrodinâmicos <30nm, monodispersos e potencial zeta perto de zero. A AlClFt mostrou conservar as propriedades físico-químicas quando no nanoconjugado e mostrou-se estável por quatro meses quando conservado a 4ºC. Adicionalmente, o nanossistema de AlClFt e PM inibiu >90% do crescimento de promastigotas e amastigotas intracelulares de L. braziliensis após da terapia fotodinâmica em concentrações onde não foi observado toxicidade nas células hospedeiras, mostrando seletividade. Por outro lado, em ex vivo e in vivo, a AlClFt não foi capaz de permear a pele de camundongos Balb/c. Já a PM no nanoconjugado, permeou até 86 vezes mais do que a PM livre após de 6 horas em sistemas ex vivo. A PM acumulou-se mais no baço. Os sistemas de nanoemulsão não foram genotóxico, tampouco causaram irritabilidade, vermelhidão e laceração durante e após do tratamento tópico. A análise do hemograma mostrou diminuição na contagem de plaquetas da maioria dos camundongos, as outras células do sangue não foram alteradas. Estes resultados, além de originais, propõem um nanoconjugado promissor para ser utilizado no modelo murino de Leishmaniasis cutânea.