Garlic viral complex: identification of Potyviruses and Carlavirus in Central Brazil

Abstract

Garlic viruses often occur in complex infections in nature. In this study, a garlic virus complex, collected in fields in Brazil, was purified. RT-PCR was performed using specific primers designed from the consensus regions of the coat protein genes of Onion yellow dwarf virus, a garlic strain (OYDV-G) and Leek yellow stripe virus (LYSV). cDNA of Garlic common latent virus (GCLV) was synthesized using oligo-dT and random primers. By these procedures individual garlic virus genomes were isolated and sequenced. The nucleotide sequence analysis associated with serological data reveals the presence of two Potyvirus OYDV-G and LYSV, and GCLV, a Carlavirus, simultaneously infecting garlic plants. Deduced amino acid sequences of the Brazilian isolates were compared with related viruses reported in different geographical regions of the world. The analysis showed closed relations considering the Brazilian isolates of OYDV-G and GCLV, and large divergence considering LYSV isolate. The detection of these virus species was confirmed by specific reactions observed when coat protein genes of the Brazilian isolates were used as probes in dot-blot and Southern blot hybridization assays. In field natural viral re-infection of virus-free garlic was evaluated.

Infecções virais em alho são normalmente causadas por um complexo viral. Neste estudo, um complexo viral de alho, coletado em campo, foi purificado. Procedeu-se à amplificação por RT-PCR usando oligonucleotídeos desenhados para regiões-consenso dos genes das proteínas capsidiais de Onion yellow dwarf virus, estirpe do alho e de Leek yellow stripe virus. cDNA de Garlic common latent virus foi sintetizado usando oligo-dT e oligonucleotídeos aleatórios. Por estes procedimentos clones de diferentes espécies virais foram isolados e sequenciados. A análise das sequências nucleotídicas e os resultados sorológicos revelaram a presença dos Potyvirus OYDV-G e LYSV e do Carlavirus GCLV, simultaneamente infetando plantas de alho. As seqüências de aminoácidos deduzidos dos isolados brasileiros foram comparadas com aquelas de vírus relacionados, relatados em diferentes regiões do mundo. A análise mostrou pequena variabilidade em relação aos isolados brasileiros de OYDV-G e GCLV, e maior divergência em relação ao isolado de LYSV. A detecção destas espécies virais também foi obtida por reações específicas observadas quando o gene da proteína capsídica dos isolados brasileiros foi usado como sonda em ensaios de hibridização do tipo dot-blot e Southern blot. Em campo, a re-infecção natural de alho livre de vírus foi avaliada.