Desenvolvimento e avaliação in vitro de complexo de inclusão de cloreto de alumínio ftalocianina com ciclodextrina para a terapia fotodinâmica tópica de câncer de pele

Abstract

Este trabalho teve como objetivo desenvolver complexos de ciclodextrinas com o agente fotossensibilizante altamente lipofílico cloro-alumínio ftalocianina (ClAlFc) para possibilitar a solubilização do fármaco em meio aquoso, melhorar sua estabilidade fotodinâmica e favorecer sua penetração cutânea para possibilitar o uso na terapia fotodinâmica (TFD) tópica de câncer de pele. Inicialmente, um método analítico por HPLC foi desenvolvido e validado em termos de seletividade, robustez, linearidade, limite de detecção e quantificação, precisão e recuperação para quantificação da ClAlFc recuperada de pele de suínos. A solubilidade da ClAlFc em metanol, etanol e solução aquosa de Tween® 20 a 5%, pH 7,4, foi calculada como sendo 9,9 ± 2,8, 5,7 ± 0,3 e 0,7 ± 0,4 mg/mL, respectivamente. Os complexos foram formados com hidroxipropil-β-ciclodextrina (HP-βCD) e, após análise de diagrama de solubilidade, determinou-se a proporção de 20% de HP-βCD no preparo do complexo. O complexo foi caracterizado por espectrofotometria de absorção e emissão de fluorescência, confirmando que a ClAlFc mantém suas características fotodinâmicas mesmo complexada. Análises calorimétricas do agente fotossensibilizante confirmaram sua estabilidade térmica sozinho e na mistura de 1:1 (m/m) com a HP-βCD. Os ensaios de citotoxicidade com células de câncer de pele melanoma da linhagem B16F10, no escuro, mostraram que as concentrações tóxicas para ClAlFc e ClAlFc-HP-βCD são de 39,06 e 625 ng/mL, respectivamente. Com a aplicação da TFD na mesma linhagem celular, a HP-βCD, reduziu discretamente a viabilidade celular em baixas concentrações (1,56 e 6,25 mg/mL), mas reduziu para 37% quando utilizada a concentração de 25 mg/mL. A ClAlFc livre reduziu em 67% a viabilidade celular em quaisquer concentrações analisadas (0,08; 0,31 e 1,25 mg/mL). No entanto, o complexo ClAlFc-HP-βCD reduziu significativamente (p < 0,05) a viabilidade celular em 62% somente na concentração de 1,25 mg/mL. Por fim, ensaios de permeação in vitro foram realizados em células de difusão do tipo Franz modificadas, em pele de orelha de suínos e com o complexo em pH 7,4 por ter apresentado melhor estabilidade frente à corrente elétrica. A utilização de microagulhas sólidas antes da permeação não mostrou-se eficaz para aumentar a permeação da ClAlFc complexada. No entanto, a utilização da técnica não-invasiva e indolor de iontoforese promoveu um aumento de 2,3 vezes na penetração de ClAlFc e foi capaz de aumentar de maneira mais rápida a penetração do fármaco para camadas mais profundas da pele se comparado com o controle de permeação passiva. Assim, o complexo ClAlFc-HP-βCD foi uma alternativa viável para a estabilização e solubilização de ClAlFc para aplicação na pele. A utilização da iontoforese possibilitou um acúmulo de agente fotossensibilizante em camadas mais profundas da pele de maneira rápida e não invasiva, possibilitando assim a TFD tópica de tumores de pele.