Análise da expressão heteróloga de uma serino protease (RnTrypsin) e de um inibidor de serino protease (RnKazalPI) salivares de Rhodnius neglectus, vetor da Doença de Chagas

Abstract

O triatomíneo Rhodnius neglectus (Hemiptera: Reduviidae) é um vetor potencial do protozoário Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. O R. neglectus apresenta em sua saliva moléculas importantes que neutralizam os mecanismos hemostáticos do hospedeiro, auxiliando na alimentação sanguínea e, de forma indireta, na transmissão do protozoário. Assim, a saliva desse inseto hematófago se torna um relevante alvo de pesquisas devido à presença de moléculas com elevado potencial farmacológico, como por exemplo serino proteases e inibidores de serino protease. Este estudo teve por objetivo a expressão heteróloga da serino protease do tipo tripsina (RnTrypsin) e do inibidor de serino protease tipo Kazal (RnKazalPI) salivares de R. neglectus. As sequências nucleotídicas das proteínas foram obtidas a partir do transcriptoma de R. neglectus, clonadas no vetor pET100/D-TOPO e expressas em bactérias Escherichia coli da linhagem BL21(DE3), BL21(DE3)pLysS e Rosetta(DE3)pLysS. A serino protease do tipo tripsina (RnTrypsin) recombinante foi observada somente na fração insolúvel após a lise das bactérias, sendo então purificada por cromatografia de afinidade e usada para a produção de anticorpos policlonais em camundongos. Após a otimização do protocolo de expressão, o inibidor de serino protease tipo Kazal (RnKazalPI) foi expresso na fração solúvel do lisado bacteriano. Como perspectiva, é pretendido utilizar o sistema de expressão de proteínas recombinantes em células de inseto/baculovírus para expressar a serino protease do tipo tripsina (RnTrypsin) recombinante na fração solúvel, e também determinar a caracterização do inibidor de serino protease tipo Kazal (RnKazalPI) recombinante solúvel, buscando contribuir na compreensão das interações entre vetor e hospedeiro e potenciais atividades farmacológicas.