Os efeitos bioestimulatórios dos agentes crosslinkers ricos em proantocianidinas e da alga Lithothamnium calcareum sobre células da polpa

Abstract

Este estudo teve como objetivo avaliar in vitro a citotoxicidade direta e o potencial dentinogênico dos agentes crosslinkers ricos em proantocianidinas (extrato da semente da uva e ácido tânico) e do cimento obtido a partir do extrato da alga Lithothamnium calcareum sobre cultura primária de células pulpares humanas. Células pulpares foram obtidas a partir de terceiros molares de adultos com idades entre 18 e 30 anos. Culturas primárias foram estabelecidas e cultivadas até a obtenção do número adequado de células. Os agentes crosslinkers e remineralizantes foram diluídos previamente ao início de cada experimento. Extrato da semente da uva (GSE) e ácido tânico (TA) foram dissolvidos em água obtendo duas concentrações (0,65% e 0,0065%) e avaliados nos períodos 1 hora, 7, 14 e 21 dias para os testes de metiltetrazolium (MTT) e análise da produção de óxido nítrico (NO). Alga e hidróxido de cálcio, juntamente com o solvente dimetilsulfóxido (DMSO) nas concentrações de 0,2% e 0,02%, nos tempos imediato e 24 horas, foram avaliados utilizando os mesmos testes. Após 21 dias de diferenciação osteogênica, foram realizadas as análises de proteína total (PT), fosfatase alcalina (FA) e Alizarin Red para GSE/DMSO a 0,65% e 0,0065%. Para compor a análise de citotoxicidade, a viabilidade celular foi avaliada por meio do teste de produção de desidrogenase succínica e o estresse oxidativo foi avaliado por meio do ensaio de óxido nítrico. Para avaliar o potencial dentinogênico, as análises de proteína total (PT), fosfatase alcalina (FA) e formação de nódulos de mineralização foram realizadas após 21 dias de contato com os extratos. Coloração pelo brometo de etídio/laranja de acridina foi realizado para ilustrar os efeitos dos agentes crosslinkers (GSE e TA) sobre as células da polpa. Os resultados foram avaliados por testes não paramétricos (Kruskall-Wallis e Mann-Whitney; α=0,05). De acordo com os dados obtidos, foi possível observar que na análise de viabilidade celular para os agentes crosslinkers, houve um comportamento dependente da concentração utilizada, porém não de forma linear. A menor concentração de extrato de uva testada (0,0065%) apresentou resultados favoráveis tanto para a viabilidade celular em todos os períodos analisados, quanto a produção de NO, não havendo diferença significante do controle negativo para todos os tempos. Os agentes remineralizantes foram capazes de aumentar a viabilidade celular após 1 horas de contato, sendo que apenas o grupo do hidróxido cálcio 0,2% diferiu significativamente dos demais. Não houve diferença significante entre os grupos para a produção de óxido nítrico. O GSE e TA não diferiram do grupo controle quanto a produção de proteína total e fosfatase alcalina. Foram capazes de produzir nódulos de mineralização porém sem diferença estatisticamente significante do controle positivo. Os agentes crosslinkers e remineralizantes apresentam efeitos biológicos sobre as células da polpa.