Análise estrutural e de expressão do gene pacC de Paracoccidioides brasiliensis

Abstract

O pH ambiental desempenha um papel importante na fisiologia de inúmeros microrganismos, determinando níveis de transcrição de genes cujos produtos funcionam na fronteira celular ou em seu exterior. Na adaptação de Aspergillus nidulans a diferentes valores de pH o fator transcricional PacC tem um papel importante, sendo ativado por uma via de treansdução de sinal em respsta a pH neutro/básico. Homólogos ao gene pacC foram isolados em diversos outros fungos. Em fungos como a Candida albicans e Fusarium oxysporum, foi demonstrado que PacC está envolvido em mecanismos de patogenicidade. Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico, endêmico na América Latina, podendo provocar severa micose sistêmica em humanos. No presente trabalho foi isolado e seqüenciado um gene de P. brasiliensis ortólogo ao pacC de A. nidulans. A seqüência obtida foi avaliada, in silico, quanto a sua organização estrutural. O gene apresenta 2837 nucleotídeos e quatro íntrons. A proteína predita é composta de 676 resíduos de aminoácidos, possuindo massa molecular de aproximadamente 72,4 kDa. Foi demonstrado que a proteína predita a partir do gene em estudo possui regiões conservadas presentes na maioria das seqüências orólogas já descritas na literatura científica, apresentando maior identidade com a proteína de Trichophyton rubrum (50,2%). O perfil de expressão do gene pacC após crescimento de P. brasiliensis em meios de cultura com pH ácido, neutro e básico, revelou a presença do transcrito nas três condições de cultivo., por meio de experimento de RT-PCR. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT

Environmental pH is important for several microorganisms physiology, intervening at the transcriptional level of gene products which act at the cellular surface or outside the cell. In the ascomycete Aspergillus nidulans, cellular adaptation to different pH values is provided by the PacC transcriptional factor, which is activated by a signal transduction pathway triggered by neutral or basic pH. Homologues to the pacC gene were isolated from different fungi. In Candida albicans and Fusarium oxysporum, the PacC factor is related to pathogenicity mechanisms. Paracoccidioides brasiliensis is a dimorphic fungus, endemic in Latin America, and cause a severe systemic mycosis in humans. In this work, a P. brasiliensis gene, homologous to A. nidulans pacC, was isolated and sequenced. DNA sequence was evaluated, in silico, concerning its structural organization. P. brasiliensis pacC gene presents 2937 nucleotides and four introns. The predicted protein is composed of 676 amino acid residues, with a molecular mass of 72.4 kDa. The putative PacC protein presents motifs conserved in the majority of the published homologous sequences. The highest identity is with Trichophyton rubrum PacC (50.2%). Expression analyses of P. brasiliensis pacC gene, after fungal growth in acidic, neutral and alkaline pH, demonstrated that it is transcribed in all the conditions assayed.