Obtenção de soja (Glycine max (L.) Merril) geneticamente modificada com silenciamento do gene tnio-inositol 1-fosfato sintase (mips) para redução do fator antinutricional fitato

Abstract

O estoque de fósforo nas sementes das plantas ocorre principalmente na forma de fitato (mio-inositol 1,2,3,4,5,6 hexafosfato). Entretanto, o fósforo do fitato não é prontamente digerido por animais monogástricos, e grande parte do fósforo presente nos grãos utilizados na alimentação humana e animal é excretada pelo trato gastrintestinal. Produzir sementes com menor teor de fitato é um dos objetivos dos programas de melhoramento de plantas. Isto é importante para aumentar o potencial nutricional dos grãos de legumes e reduzir o fósforo eliminado pelas fezes, reduzindo o impacto negativo no meio-ambiente. Mio-inositol 1-fosfato sintase (MIPS) catalisa um passo chave da biossíntese do fitato. O gene mipsGm (que codifica para MIPS) foi isolado de sementes imaturas de soja e uma construção para interferência de RNA (RNAi) foi gerada com um fragmento de 719 pb da região codificante. O vetor pKannibal foi utilizado para clonar estes fragmentos e produzir a molécula de dsRNA. O gene ahas foi inserido no vetor final e usado para a seleção dos eventos de soja geneticamente modificada. Dezenove linhagens transgênicas de soja (Ro) foram geradas e caracterizadas. As progênies (Rj) foram analisadas para detectar a presença dos transgenes inseridos pelas técnicas de PCR e Southern blot. Exceto por uma linhagem, observou-se a ausência dos transgenes na geração Ri. Análises subseqüentes revelaram que este fato está relacionado ao bloqueio total da expressão do gene mipsGm endógeno, mostrando que a expressão deste gene durante a embriogênese é fundamental para o desenvolvimento do embrião e das sementes. Uma linhagem revelou a presença de ambos os transgenes na geração Ri. Análises revelaram uma redução de 33,04% a 94,55% no teor de fitato nas sementes maduras desta linhagem (12i).