Investigação de potenciais sítios reservatórios para a infecção criptocócica latente e o papel dos macrófagos na dormência de Cryptococcus neoformans

Abstract

Uma característica marcante da criptococose, doença causada pelo fungo Cryptococcus neoformans (Cn), é o estabelecimento de uma infecção latente, normalmente em granulomas pulmonares. Não obstante, acredita-se na existência de outros sítios anatômicos reservatórios de leveduras dormentes (D-Cn). Os macrófagos (MØ) desempenham um papel paradoxal na resposta à infecção, sendo importantes para o seu controle, mas também associados ao abrigo intracelular, persistência e disseminação de Cn no hospedeiro. Objetivamos aqui identificar potenciais sítios reservatórios da infecção criptocócica latente em modelo experimental murino, bem como esclarecer os mecanismos subjacentes à sua manutenção ou reativação com base na interação entre D-Cn e MØ in vitro. Primeiramente, caracterizamos e validamos linhagens fluorescentes de Cn quanto à expressão de determinados fenótipos relevantes, incluindo dormência, e aplicabilidade em experimentos de interação Cn-hospedeiro. Isso nos permitiu demonstrar características morfológicas e mecanismos regulatórios pós-transcricionais associados ao fenótipo dormente em Cn. Por meio da infecção experimental de camundongos, observamos que Cn foi capaz de disseminar para uma diversidade de sítios anatômicos, incluindo sítios extrapulmonares previamente associados à infecção latente, como o trato urogenital, e sítios nunca relatados na infecção murina mas associados à infecção latente em outros modelos de patógenos, como a medula óssea. A análise do transcriptoma do MØ incubado com Cn na fase exponencial, estacionária (S-Cn) ou dormente mostrou que D-Cn promoveu uma reduzida e específica modificação transcricional do macrófago, mas semelhante a S-Cn. D-Cn reteve a capacidade de modular no macrófago genes importantes para a resposta imune, como aqueles envolvidos em vias do inflamassoma. Inclusive, D-Cn foi incapaz de promover a secreção de IL-1β dependente do inflamassoma NLRP3 em macrófagos pré- ativados, diferentemente de Cn não dormente. Também avaliamos o papel do MØ, sob diferentes perfis de polarização, na manutenção/saída da dormência do fungo. Observamos um aprofundamento do fenótipo dormente na população de D-Cn intracelular independentemente do perfil fenotípico do MØ. Em adição, leveduras presumivelmente exocitadas que foram encontradas no sobrenadante de cultura reativaram. No entanto, a reativação foi frustrada por MØ classicamente ativados, por meio da produção de óxido nítrico. Em conclusão, nossos resultados suportam a hipótese da existência de sítios reservatórios extrapulmonares na infecção criptocócica. Ademais, indicam que os macrófagos atuam como sítios de indução e persistência de células dormentes na infecção criptocócica latente, sendo o fenótipo de polarização dessas células, reflexo do status da resposta imune do hospedeiro, determinante para a manutenção ou reativação dessa infecção.