Avaliação do papel da hipermucoviscosidade na patogenicidade de uma linhagem de Klebsiella pneumoniae K64 XDR causadora de bacteremia

Abstract

Klebsiella pneumoniae é uma bactéria Gram-negativa encapsulada que normalmente afeta pacientes imunocomprometidos. Na década de 1980, uma nova variante foi descoberta e chamada de hipervirulenta (hvKP). Esta é caracterizada por causar abscessos hepáticos em pessoas consideradas saudáveis, além de poderem se espalhar metastaticamente e de apresentarem o fenótipo de hipermucoviscosidade (hmv). Este pode ocorrer devido à expressão dos reguladores rmpA e/ou rmpA2, e é detectado por um string test positivo. Uma linhagem de K. pneumoniae (Kp 34) isolada de um paciente com bacteremia em Brasília apresentou extensiva resistência à antibióticos (XDR) e alta virulência, apesar de ser considerada atípica por não apresentar sorotipo capsular K1 ou K2 e não possuir os genes rmpA e rmpA2. O foco deste trabalho foi avaliar o papel da hipermucoviscosidade na patogênese de Kp 34 através de mutagênese com o transposon TnPhoA. 100 mutantes foram obtidos e analisados em relação à presença do fenótipo hmv, aqueles não hipermucoviscosos foram selecionados e avaliados com relação à sua curva de crescimento, presença de cápsula, produção de biofilme, sobrevivência em sangue e soro humanos, sobrevivência em células HEp-2 e citotoxicidade, indução da produção de NO e de PPAR-γ por essas células. Além disso, AP-PCRs seguidas de sequenciamento foram realizadas para identificar os possíveis genes interrompidos durante a mutagênese. Os resultados nos mostraram que a perda do fenótipo hmv afetou a capacidade dos mutantes em produzir biofilme e em sobreviver em sangue humano. Assim como afetou a capacidade de células HEp-2 infectadas de induzir a produção de NO. Porém, o fenótipo hmv não aparenta ser crucial na interação dessa linhagem com células epiteliais, pois os mutantes foram capazes de sobreviver mais no interior dessas células, além de serem mais citotóxicos do que Kp 34. Genes relacionados ao transporte de sideróforos e de ferro, transportadores ABC, sistemas de efluxo, proteínas ligadoras de ATP, sistema de secreção do tipo II e L-Fucose isomerase podem ter sido interrompidos durante a mutagênese, afetando assim a expressão do fenótipo de hipermucoviscosidade.