Desenvolvimento e caracterização de anticorpos humanos com potencial neutralizante do vírus Zika

Abstract

A infecção pelo vírus Zika está associada a complicações neurológicas e a anomalias congênitas e é considerada um problema de saúde pública em todo o mundo, que ainda não possui abordagens profiláticas e terapêuticas eficazes estabelecidas. Entre as estratégias de tratamento, o desenvolvimento de novos anticorpos monoclonais humanos engenheirados se ressai por sua alta afinidade, maior especificidade, segurança farmacológica e sua maior capacidade protetora. Nesse sentido, o objetivo desse trabalhou foi o desenvolvimento de anticorpos específicos para o loop de fusão do domínio II do envelope viral, região que exerce função na liberação do RNA viral no citoplasma, durante a infecção, e é altamente conservado entre os Flavivírus. Para isso, desenvolvemos anticorpos humanos específicos, utilizando a tecnologia de Phage Display. A seleção foi realizada em 4 ciclos de seleção contra o loop de fusão do vírus, usando duas estratégias de eluição dos fagos específicos: com pH ácido, e com o antígeno viral, livre e em excesso, competindo pela ligação ao anticorpo. A análise do progresso de seleção revelou que houve enriquecimento de anticorpos específicos ao antígeno viral. Os anticorpos que poderiam apresentar maior afinidade foram engenheirados no formato de scFv (Fragmento variável de cadeia única), e três deles foram produzidos em altos níveis, em sistema heterólogo de células bacterianas, e purificados, por cromatografia de afinidade em coluna de Níquel. Foi demostrado que os anticorpos recombinantes selecionados e produzidos apresentaram capacidade de ligação ao antígeno viral, na sua forma isolada e na sua conformação nativa na partícula do vírus Zika. Também foi mostrado que os anticorpos foram capazes de neutralizar a infecção por vírus Zika in vitro. Esses dados evidenciam o potencial neutralizante dos anticorpos humanos desenvolvidos nessa pesquisa e revelam a relevância deles no desenvolvimento de metodologias eficientes e seguras de tratamento de infecções por vírus Zika e de outros Flavivirus.