Influência do Trypanosoma cruzi sobre as vias de reparo de DNA da célula hospedeira

Abstract

A resposta ao dano no DNA (DDR) é essencial para a manutenção do bom funcionamento da célula. Esta resposta consiste na ativação de checkpoint do ciclo celular e o mecanismo de reparo de DNA. Diferentes vias de reparo são ativadas dependendo do tipo de lesão. A cisplatina é uma droga intercalante que provoca adutos no DNA e ligações interfitas. O peróxido de hidrogênio (H2O2) é um agente oxidante que, em concentrações suprafisiológicas, causa dano ao DNA e outras moléculas. Os principais danos causados pelo estresse oxidativo são modificações de base e quebra de fita de DNA. Existem evidências de que o Trypanosoma cruzi, protozoário causador da doença de Chagas, atue de diversas maneiras no metabolismo da célula hospedeira, incluindo o metabolismo de DNA. Neste trabalho, analisamos a influência de duas cepas de T. cruzi, Berenice (DTU TcII) e Colombiana (DTU TcI), na resposta ao dano de DNA em células L6, de miócitos de rato. As células receberam tratamentos em duas concentrações diferentes de cisplatina e H2O2 e tiveram diversos aspectos da sua biologia celular avaliados, como viabilidade, proliferação, morfologia, degradação de DNA e expressão de genes de reparo e de ciclo celular. Percebe-se que a célula reage ao dano de DNA de forma diferente dependendo da concentração do composto usado, seja cisplatina, seja H2O2. O tratamento com cisplatina mostrou que a cepa Berenice alterou a resposta ao dano, aumentando a intensidade de algumas vias de reparo (ex. MMR) e diminuindo a intensidade de resposta a quebras de dupla-fita (DSBs), o que provocou maior degradação de DNA e maior mortalidade. Também houve maior proliferação em células infectadas com Berenice e tratadas com cisplatina. As células infectadas por Colombiana, por outro lado, apresentaram um perfil de resistência à cisplatina, com ativação de diferentes vias eficazes ao reparo de adutos de DNA (como NER). Os resultados levantaram a hipótese se a infecção por Colombiana estimula o reparo alternativo via retrotransposon LINE-1. Também foi verificado um perfil de senescência destas células, assim como em células não infectadas. O tratamento com H2O2 mostrou que a infecção pelo T. cruzi pode atuar como um elemento estressor ou protetor do DNA hospedeiro, dependendo da cepa utilizada e da concentração de H2O2. Diferenças na degradação de DNA (DSB ou SSB) sugerem que diferentes mecanismos estão atuando no reparo de DNA em cada grupo analisado. Também foi encontrada diferença na expressão de genes em células infectadas (ex. BER e HR) com a cepa Berenice, que diminuíram a intensidade de resposta no dano moderado. A infecção pela cepa Colombiana impediu a ativação de muitas das vias de resposta ao H2O2 (NER e MMR). Como, neste caso, a mortalidade não se alterou em relação ao controle, questiona-se uma influência direta do parasito no reparo de DNA do hospedeiro. As descobertas apresentadas neste trabalho contribuem para a melhor compreensão da relação parasito-hospedeiro e pode auxiliar tanto na melhor compreensão da patologia da doença de Chagas, como também ter aplicações em outras áreas, como a da pesquisa em câncer e trazer explicações para o dúbio papel oncoprotetor x oncogênico relatado para o T. cruzi.