Expressão heteróloga de fragmentos de anticorpos em Saccharomyces boulardii para tratamento da colite experimental

Abstract

Doenças Inflamatórias Intestinais são um grupo de desordens inflamatórias crônicas que envolve a Doença de Crohn e a Colite Ulcerativa. A Colite Ulcerativa é uma inflamação recorrente da mucosa que se inicia no reto e pode se estender até o cólon. Atualmente anticorpos neutralizantes de TNF aplicados por via intravenosa são os melhores medicamentos disponíveis para induzir e manter a remissão nos pacientes, mas o custo dessas terapias é muito alto além de gerar efeitos colaterais. Saccharomyces boulardii é uma levedura probiótica utilizada em medicamentos comerciais para tratamento de doenças intestinais, estudos sugerem o potencial de probióticos serem adaptados para a síntese e entrega de terapias orais. Assim a S. boulardii pode ser usada como veículo de entrega de anticorpos neutralizantes ao trato gastrointestinal, restringindo a resposta ao local da inflamação, para tratamento de diferentes doenças como a Colite Ulcerativa. Determinou-se a curva de crescimento desta levedura, bem como o grau de sensibilidade ao antibiótico G418 (50 μg/mL). Em experimentos com camundongos foi possível ainda estabelecer que o tempo de permanência desta levedura no trato digestório de camundongos quando administrada por gavagem era de 48 horas. Dois vetores foram construídos possibilitando a expressão de dois fragmentos scFv de anticorpos (anti-TNF e anti- CD3) na levedura. O protocolo de transformação da levedura foi otimizado e leveduras recombinantes obtidas. As condições de cultivo visando a maior eficiência de expressão dos genes foram estudadas, tendo sido estabelecida: 30oC, 200 rpm, em meio definido YNB tamponado (pH 5,5) por 72 horas. A expressão do scFv anti-TNF foi monitorada no sobrenadante de cultura, sendo este o primeiro relato de expressão heteróloga de um anticorpo pela S. boulardii. Já o scFv anti-CD3 foi expresso fusionado à proteína de parede SED1, sendo este o primeiro relato de apresentação de um fragmento de anticorpo na parede celular dessa levedura. Quando a S. boulardii produtora do scFv anti-TNF foi administrada oralmente em camundongos com colite induzida por Dextrana Sulfato de Sódio houve uma melhora do índice de atividade da doença quando comparado ao grupo doente sem tratamento, o que indica o efeito da neutralização do TNF para diminuição da inflamação.