O patossistema begomovírus e mosca-branca em tomateiro : relato de uma nova espécie e controle do vetor Bemisia tabaci

Abstract

As lavouras de tomateiro são altamente afetadas por doenças causadas pelos vírus do gênero Begomovirus que têm causado um grande impacto nas principais regiões produtoras devido à falta de métodos de controle eficientes. Os begomovírus apresentam alta variabilidade genética, favorecendo o surgimento de novas variantes com potencial de causar prejuízos drásticos. Em uma visita de rotina a uma lavoura de tomateiro rasteiro em Luziânia, Goiás, uma planta de tomateiro (cv. AP533, suscetível à infecção por begomovírus) chamou a atenção por apresentar sintomas severos, caracterizado por folhas com manchas cloróticas e deformação foliar. Um novo begomovírus foi identificado nesta planta a partir da análise com a tecnologia Nanopore. A sequência do genoma completo foi determinada e confirmada por sequenciamento Sanger. O DNA-A do novo begomovírus, tentativamente nomeada como tomato begomovirus MoLDi (ToMoLDiV), apresentou maior identidade de nucleotídeos com tomato golden leaf distortion virus (81,65%; ToGLDV; acesso HM357456), confirmando o isolado como potencial novo membro do gênero. A organização genômica é típica de um begomovírus do novo mundo. A sequência conservada do nonanucleotídeo geminiviral e os sítios de ligação da Rep (iterons) foram identificados em ambos os segmentos. Filogeneticamente, o ToMoLDiV está mais próximo aos begomovírus ToGLDV, tomato mosaic severe dwarf virus (ToMSDV) e tomato interveinal chlorosis virus 2 (ToICV2). A agroinoculação do clone dimérico do componente DNA-A (C16A) resultou na detecção do DNA-A em 12 de 103 plantas das espécies Solanum lycopersicum cv. Santa Clara e cv. Lanai, Nicotiana tabacum cv. Samsun, N. rustica e Nicandra physaloides. Entretanto, não foram observados sintomas nessas plantas, indicando que o clone infeccioso do DNA-B será necessário para o cumprimento dos postulados de Koch. O vírus ToMoLDiV foi encontrado em uma lavoura onde já foi registrada a ocorrência dos begomovírus tomato severe rugose virus (ToSRV) e ToICV2, evidenciando uma rica diversidade de espécies de begomovírus nessa região produtora. O surgimento de novas variantes de begomovírus também pode ser favorecido pelas altas populações de moscas-brancas Bemisia tabaci que persistem nos campos devido ao desenvolvimento de resistência aos princípios químicos utilizados para seu controle. Muitos grupos de pesquisa têm investigado métodos alternativos de manejo desses insetos e o RNA interferente (RNAi) tem mostrado seu potencial no controle dessas pragas, apesar da atividade de RNases inespecíficas. Aqui, avaliamos os efeitos em moscas-brancas da ingestão de dsRNAs (fita dupla de RNA) contra os genes que codificam as proteínas Loquacious (LOQ), HSP70, Distroglicana (DIS), Tuberina (TUBE) e Laminina (LAMI). Foi verificado que a expressão de Loquacious e HSP70 é maior em estádios ninfais da mosca-

6 branca, porém, como a realização de ensaios de alimentação em dieta artificial com ninfas é inviável, manteve-se a avaliação do silenciamento de todos os genes em adultos. Os bioensaios utilizando dsRNA de tomato mosaic virus (ToMV) comercial (controle negativo) confirmaram a presença de compostos tóxicos às moscas-brancas nos lotes de dsRNAs comerciais, então optou-se por avaliar o silenciamento dos genes-alvo com administração de dsRNAs produzidos in vitro no laboratório. Os ensaios foram realizados basicamente com uma solução de sacarose (SAC) a 30% como dieta artificial. Nos testes com a ingestão de dsLOQ-B, dsTUBE, dsDIS, dsLAMI e dsHSP70-B, nenhum tratamento resultou em taxas de letalidade relevantes em relação aos controles. Porém, uma diferença significativa entre as curvas de sobrevivência dos tratamentos dsLAMI em relação a dsToMV foi observada, indicando possível efeito negativo da ingestão de dsLAMI. A quantificação da expressão de Laminina nas moscas-brancas após 120 horas de ensaio mostrou uma expressão em dsLAMI significativamente mais baixa em relação ao tratamento SAC. Apesar da tendência à letalidade observada após a ingestão de dsLAMI, o uso dos dsRNAs contra os genes-alvo avaliados com abordagens mais complexas, como a expressão em plantas transgênicas, ainda não é indicado. Foi verificada baixa de letalidade após a ingestão de dsHSP70-B, ao contrário dos ensaios já relatados. Portanto, será necessária a avaliação da degradação do dsRNA no intestino das moscas-brancas e do uso dos dsRNAs para genes-alvo associados à dsRNAs contra as RNases responsáveis pela degradação, para aumentar a eficiência do silenciamento visando induzir maior letalidade nas moscas-brancas.