Expressão Heteróloga da Proteína SM 10.3 em Sistema de Expressão Baculovírus

Abstract

O Schistosoma mansoni é um helminto que parasita o intestino e vasos sanguíneos de seu hospedeiro mamífero, gerando vários agravos para a saúde do hospedeiro, podendo levar a morte. Uma proteína presente nas glândulas esofágicas do S. mansoni, a Sm10.3, expressa em bactérias, demonstrou ação protetiva em testes com animais, podendo se tornar uma boa candidata para o desenvolvimento de novas vacinas. Assim, seria

interessante expressá-la em um sistema eucarioto, como o sistema Bac-to- Bac. Este sistema de expressão utiliza o baculovírus infectando células de

insetos. Nesse sistema, o geneSm10.3 foi expresso sob o promotor da poliedrina, que é altamente expresso neste sistema. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão da proteína Sm10.3 no sistema Bac-to-Bac. O cDNA de S. Mansoni foi clonado em pGEM-T Easy. Os clones obtidos foram subclonados no vetor pFastBac Amino. Após isso o gene recombinado foi clonado em células DH10Bac para geração do bacmídio recombinante. As células de insetos foram transfectadas com os bacmídios recombinantes com o auxílio de lipossomo catiônico. As proteínas recombinantes foram expressas em células de inseto. Apenas um clone da proteína recombinante foi reconhecido por anticorpos anti-6xHis, por western blot. Nele foram detectadas duas proteínas de tamanhos distintos, uma com o tamanho esperado de 21 kDa e outra menor, de aproximadamente 15 kDa, hipoteticamente gerada após o transcrito ter sofrido splicing. Observou-se que as proteínas recombinantes não foram fusionadas à proteína da poliedrina. Este trabalho atingiu o objetivo de clonar e expressar o gene Sm10.3 em sistema de expressão baculovírus, mostrando a eficácia deste sistema para a produção de proteínas heterólogas.