A família de fragmentos gênicos variáveis VH10 apresenta características determinantes para a geração de anticorpos anti-DNA

Abstract

Anticorpos anti-DNA são um dos principais alvos para estudos de algumas doenças autoimunes uma vez que são encontradas no soro de pacientes com lúpus eritematoso sistêmico (LES) e influenciam o aparecimento de sintomas e na progressão da doença. Apesar da importância acerca desses anticorpos sua origem e manutenção no organismo não são completamente compreendidas. A presença de linfócitos B com repertórios autorreativos no organismo pode favorecer o aparecimento de anticorpos patogênicos que interagem com estruturas próprias do organismo. Mostramos anteriormente que uma família específica de segmentos gênicos variáveis, VH10, tem a tendência a dar origem a anticorpos com capacidade de ligação ao DNA. Nesse estudo procuramos mostrar o papel dessa família VH na ligação específica ao DNA. No intuito de se investigar quais as regiões determinantes para a ligação de anticorpos formados por segmentos V provenientes da família VH10 ao DNA, foram produzidos quatro fragmentos de anticorpos no formato scFv (fragmento variável de cadeia única). As sequências germinais foram mantidas para duas construções: VH10 (descrito como ligante) e VH4 (não-ligante) foi utilizada como controle. Nas outras duas construções a região do loop da CDR2 foi trocada entre VH10 e VH4 formando as construções variantes VH10-H24 e VH4-H210. A parte remanescente da construção, CDR3 e cadeia leve, é compartilhada entre os scFvs. A cadeia leve utilizada é uma recombinante da cadeia leve substituta (SLC) característica de células B em desenvolvimento e expressa apenas temporariamente na medula óssea (MO). Como essas novas moléculas apresentam características únicas para estudos de ligação antigênica no contexto de desenvolvimento das células B, foram nomeadas

de scpre-BCRs. A capacidade de ligação dos scpre-BCRs foi acessada por ELISA. O scpre- BCR VH10 apresentou capacidade de ligação a diferentes tipos de DNA, já o scpre-BCR VH4

não apresentou atividade de ligação. A variante VH10-H24 onde o loop da CDR2 foi trocado apresentou perda da atividade de ligação, enquanto a variante VH4-H210 apresentou ganho na capacidade de ligação contra os antígenos de ssDNA e dsDNA. A modelagem dos sítios de ligação do scpre-BCR VH10 sugere que um arcabouço positivamente carregado formado pelos resíduos da CDR2 é elemento estrutural responsável pela ligação. Neste trabalho nós mostramos que a reatividade contra o DNA pode estar codificada no genoma dos indivíduos haja vista o mapeamento do sítio fundamental para a ligação ao DNA localizada no loop estrutural da CDR2, parte integrante do gene V. Isso sugere um papel para essa reatividade germinal nas fases inicias do desenvolvimento das células B. Dessa forma, enquanto que a autorreatividade ao DNA possa levar a autoimunidade, parece existir um trade-off onde a necessidade de sinalização celular nos estágios iniciais das células B age em conjunto à mecanismos autorreativos.