Fatores que afetam a produção de embriões pela transferência intrafolicular de ovócitos imaturos (TIFOI) em bovinos

Abstract

A transferência intrafolicular de ovócitos imaturos (TIFOI) é uma técnica alternativa para produção de embriões bovinos, na qual ovócitos imaturos, são injetados em um folículo dominante e são maturados, fecundados e tem o desenvolvimento inicial in vivo. Apesar de seu potencial de aplicação, a TIFOI ainda apresenta uma baixa taxa de recuperação embrionária no dia 7 (D7) após a injeção. Sendo assim, muitos aspectos do processo ainda precisam ser esclarecidos para que a sua eficiência possa ser melhorada.. O objetivo deste trabalho foi tentar identificar fatores que possam afetar os resultados da técnica. Para isso avaliou-se (1) a cinética de maturação nuclear de ovócitos submetidos à TIFOI; (2) se o tempo em que os ovócitos permanecem no folículo é suficiente para que ocorra a maturação completa; (3) o número de ovócitos mais adequado a serem injetados no folículo préovulatório no momento da TIFOI; (4) se o tempo em que os ovócitos permanecem no folículo após a injeção afeta a taxa de recuperação embrionária; (5) diferentes momentos para realizar a injeção após a remoção do implante de progesterona (P4); e, (6) se o momento da indução da ovulação e a adequação de um protocolo de sincronização das ovuladoras afeta a taxa de recuperação embrionária. Para isso, foram realizados 4 estudos: (1) ovócitos imaturos obtidos de ovários de abatedouro, foram injetados no folículo pré-ovulatório de vacas ovuladoras (TIFOI) e mantidos no folículo por 8, 12 ou 16 h, ou foram maturados in vitro (MIV) por 0, 8, 12 ou 16 h. Para a avaliação da capacidade de desenvolvimento embrionário, os ovócitos injetados no folículo préovulatório foram recuperados por OPU 12 h após a TIFOI e submetidos à fecundação in vitro (FIV) imediatamente após a OPU ou foram maturados in vitro por 4 h adicionais ou 10 h após a OPU. Os ovócitos do grupo controle foram maturados in vitro por 12, 16 e 22 h, antes de serem submetidos à FIV. (2) avaliou-se a taxa de recuperação embrionária após a injeção de 10, 25 ou 50 complexos cumulus ovócitos (CCOs) durante a TIFOI; (3) ovócitos imaturos foram injetados, 24, 36 e 52 h após a remoção do implante de progesterona e 8 dias depois realizou-se a coleta de embriões; (4) ovócitos imaturos foram injetados 30 (TIFOI 30h) ou 36 (TIFOI D9,5) h após a remoção do implante de progesterona e a indução da ovulação foi realizada 24 h após a remoção de P4 (TIFOI D30h), 40 h após a remoção de P4 ou 52 h remoção de P4, e 8 dias depois realizou-se a coleta de embriões. No estudo 1, os ovócitos maturados por TIFOI apresentaram maturação nuclear semelhantes àqueles maturados in vitro; e o tempo durante o qual os ovócitos permaneceram dentro do folículo após a TIFOI não afetou a taxa de recuperação e sua capacidade de serem fecundados e se desenvolverem em embriões; No estudo 2, o número de ovócitos injetados no folículo não afetou a taxa de recuperação embrionária; No estudo 3, o tempo em que os ovócitos permanecem no folículo após a TIFOI ser realizada em diferentes momentos afetou a taxa de recuperação embrionária. Finalmente, no estudo 4, o momento em que a indução da ovulação é realizada interfere na taxa de recuperação embrionária. Conclui-se que apesar de esclarecer alguns fatores importantes para o desenvolvimento da TIFOI, a taxa de recuperação embrionária ainda não foi melhorada.