Elucidação dos mecanismos de integração de minicírculos de kDNA de trypanosoma cruzi no genoma do hospedeiro

Abstract

A doença de Chagas (DC), infecção tropical causada pelo parasita Trypanosoma cruzi (T. cruzi), afeta de 6 a 8 milhões de pessoas no mundo. Ainda não existe um tratamento adequado para a doença na sua forma avançada e a causa para síndrome chagásica severa não está muito bem estabelecida. Acredita-se que fenômenos de transferência lateral de minicírculos de kDNA (minikDNA) estejam envolvidos no desenvolvimento das manifestações clínicas e que vesículas extracelulares (VEs) de T. cruzi sejam o principal veículo de transferência dessas moléculas para o genoma da célula. Sabe-se que os minikDNA se integram preferencialmente em regiões de retroelemento LINE -1 e que sequências de minikDNA foram encontradas no genoma de células somáticas e de tecidos tais como o tecido cardíaco e do intestino. No entanto, ainda não foram descritos quais os tipos celulares mais permissivos à integração de minikDNA e quais os mecanismos envolvidos na dinâmica de integração dessas moléculas no genoma hospedeiro. Dessa forma, a análise de integração pelo método de quantificação de kDNA e nDNA por qPCR permitiu-nos verificar que diferentes linhagens celulares foram permissivas à integração de sequências de minikDNA, sendo as células HEK 293 e Caco 2 as mais permissivas. Verificamos também que VEs de T. cruzi contêm minikDNA na conformação de dupla fita. A infecção por T. cruzi em células HEK 293 aumentou a expressão de retroelemento LINE-1, principalmente às 72 horas pós-infecção. O uso de inibidores de transcriptase reversa inibiu a integração reforçando a hipótese de que os retroelementos LINE-1 têm um importante papel na integração do kDNA. Inibidores de vias de reparo, histona deacetilase (HDAC) e síntese de purina, também inibiram a integração do kDNA. Vale ressaltar que a expressão reduzida para os genes envolvidos nos mecanismos de checkpoint e vias de reparo no DNA, tais como p53, ATM, XP-A e XP-V, impediram a integração do kDNA. Assim, conclui-se que a integração do kDNA parece depender do pleno funcionamento da maquinaria de reparo do DNA. Desse modo, postulamos que a integridade das vias BER, NER, HR, NHEJ possa ter alguma relação com a permissividade à integração dos minicíruclos de kDNA, pois essas vias influenciam na atividade dos retroelementos.