Avaliação de folículos pré-antrais suínos após resfriamento e criopreservação

Abstract

O objetivo deste trabalho foi testar o efeito do resfriamento seguido da criopreservação do tecido ovariano na morfologia e ultraestrutura dos folículos préantrais suínos. Ovários de 7 porcas foram coletadas em abatedouro local. De cada ovário foram retiradas 4 finas fatias do córtex (~ 1cm2) e uma fatia foi imediatamente fixada em Carnoy (grupo controle-C.A.). As amostras foram colocadas em PBS e mantidas a 4oC por 18 horas. Após isto, uma amostra foi fixada (grupo resfriamento-RESFRI.). As outras duas amostras foram criopreservadas em 1.5 M de EG com 0.4% de sacarose em tampão PBS. Após 7 dias, as amostras foram descongeladas e o crioprotetor removido. Então, uma das amostras foi fixada (grupo criopreservação-CRIO) e as outras amostras foram colocadas em cultivo in vitro (grupo CRIOCIV) por 2h juntamente com amostras frescas de tecido ovariano (grupo controle cultivo-CCIV), e então fixadas. Para análise histológica as amostras foram desidratadas em álcool, clarificados com xileno e embebidos em parafina. Secções (5μm) foram coradas com hematoxilinaeosina (HE) e analisadas por microscopia de luz (ML). As amostras também foram processadas para microscopia eletrônica de transmissão (MET). A porcentagem de folículos morfologicamente normais (FMN) foi comparada entre os tratamentos por ANOVA e Teste de Tukey. Na análise histológica, os folículos pré-antrais do resfriamento, criopreservação e cultivo in vitro apresentaram morfologia similar ao do controle. A grande maioria dos folículos demonstrou aparência normal. A porcentagem de FMN nos grupos C.A., RESFRI, CRIO, CRIO- CIV e CCIV foram respectivamente: 839, 819, 839, 7310 e 874. Não foram encontradas diferenças significativas entre os tratamentos (P>0,05). A análise por MET, entretanto, mostrou danos irreversíveis às organelas dos folículos pré-antrais criopreservados após 18 horas de resfriamento. Os principais danos observados foram alteração na granulação do citoplasma do oócito, ruptura da membrana nuclear, inchaço das mitocôndrias com perda das cristas, desorganização das células da granulosa e descolamento destas do oócito. Em conclusão, a associação do resfriamento e criopreservação do tecido ovariano não preserva a ultraestrutura dos folículos pré-antrais suínos.