Análises da micoflora associada ao Baru (Dipteryx alata Vog.) e à caroba (Cybistax antisyphilitica (Mart.) Mart.)

Abstract

Frutos de baru, cedidos pela EMBRAPA/CPAC, foram coletados em diferentes locais da região do Cerrado e separados por matriz. As sementes aparentemente sadias foram submetidas ao método de incubação em papel filtro e plaqueamento em batata-dextrose-ágar (BDA). As sementes mal formadas e escuras, das diferentes matrizes, foram homogeineizadas em um único lote e submetidas ao método de incubação em papel filtro. Na análise de sanidade das sementes aparentementes sadias, detectou-se os seguintes fungos: Aspergillus niger, Aspergillus flavus, Aspergillus sp., Penicillium sp. Phomopsis sp. Chaetomium sp., Fusarium oxysporum, Fusarium sp., Rhizopus sp., Pestalotia sp. e Trichoderma sp.. Neste trabalho verificou-se que os fungos estudados estão distribuídos em diferentes intensidades entre as regiões e entre as matrizes de uma mesma região. As sementes escuras de baru submetidas ao método de incubação em papel filtro apresentaram 62% de Phomopsissp. Frutos de caroba coletados na região entre Brasília e Anápolis, foram separados em duas categorias: frutos que haviam iniciado a deiscência no campo e frutos fechados que completaram maturação no laboratório. As sementes foram separadas em lotes, sementes não selecionadas, sementes com bordas escuras e sementes claras. As sementes foram avaliadas quanto a incidência fungica, através dos métodos de incubação em papel filtro e BDA. A qualidade fisiológica foi avaliada através dos testes de germinação, em condições de casa de vegetação e laboratório e utilizou-se o teste de tetrazólio para avaliar a viabilidade. Na análise sanitária detectou-se os seguintes fungos: Phomopsis sp., Lasiodiplodia theobromae, A. niger, A. flavus, Aspergillus spp., Fusarium sp . e Penicillium sp. O gênero Phomopsis obteve maior incidência sobre as sementes em relação aos demais fungos. Nos três lotes (sementes não selecionadas, escuras e claras), a maior incidência de Phomopsis sp. foi constatada em sementes com bordas escuras. O poder germinativo das sementes foi influenciado pelo seu grau de escurecimento. Apesar do teste de tetrazólio ter indicado que mais de 72% das sementes escuras estavam viáveis, elas apresentaram a menor porcentagem de germinação e a maior incidência do fungo Phomopsis sp. Na terceira etapa deste trabalho procurou-se testar a patogenicidade de Phomopsis sp. em sementes de baru e de Phomopsis sp. e L. theobromae em sementes de caroba. A porcentagem de emergência de plântulas de baru oriundas de sementes inoculadas com Phomopsis sp. foi menor em relação às sementes não inoculadas, provocando tombamento e impedindo a formação de plântulas. As plântulas de caroba originadas de sementes inoculadas com Phomopsis sp. e L. theobromae não mostraram sintomas de pós emergência, sendo observada apenas a redução da germinação. Quatorze isolados de Phomopsis sp., obtidos de sementes de baru (Dipteryx alata) e caroba (Cybistax antisyphilitica), foram caracterizados utilizando-se a técnica Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD), para os isolados de cultura monospórica e não monospórica. Os isolados também foram caracterizados através de dados de crescimento em diferentes temperaturas (20, 25 e 30°C) e a morfologia (comprimento e largura dos esporos alfa e beta), para isolados de cultura monospórica. Utilizando a técnica RAPD, dos 63 primers testados, 18 foram selecionados para o estudo. Foram estimados os índices de similaridade utilizando os coeficientes de Jaccard e Dice para todos os isolados de cultura monospórica e não monospórica. As matrizes de similaridade obtidas utilizando os dois índices foram altamente correlacionadas quando comparadas pelo teste estatístico de Mantel. O índice entre as matrizes de similaridade geradas para cultura monospórica e não monospórica foi de 0,879. 103 O maior crescimento micelial da colônia de Phomopsis sp. foi a 25 °C e o isolado 2 de caroba obteve o maior crescimento micelial em todas as temperaturas. A maioria dos isolados apresentaram a forma beta, exceto o isolado 11.0 isolado 2, de caroba, apresentou a menor média para largura e comprimento da forma de esporo alfa e a menor média para comprimento do esporo beta. Foram estimados os índices de dissimilaridade para todos os isolados levando em consideração os dados de crescimento micelial, largura e comprimento do conídio utilizando o Coeficiente Manhattan. Sugere-se através das análises das coordenadas principais e de agrupamento, que o isolado 2 de caroba seja um taxon distinto. Este resultado se assemelha ao obtido em RAPDs, onde o isolado 2 possui baixa similaridade com relação aos outros isolados. Verificou-se também que os isolados 10 e 14 são morfologicamente muito semelhantes e o mesmo foi observado para RAPDs. Na avaliação dos dados morfológicos observou-se que o isolado 11, de baru, separou-se dos demais isolados. Isto não foi observado para os dados obtidos através da técnica de RAPDs. Os resultados mostraram que o agrupamento dos isolados não reflete a distribuição dos mesmos de acordo com origem e hospedeira, seja na análise genômica bem como na morfologia. A comparação da matriz gerada pelos dados de RAPD e a matriz de dados morfológicos, usando-se o teste estatístico de Mantel, não mostrou correlação. No viveiro do Departamento de Parques e Jardins (DPJ) do Distrito Federal e em condições de casa de vegetação (EMBRAPA/CENARGEN), foram constatados sintomas de tombamento em plantulas de Dipteryx alata Vog. Em ambiente úmido, sobre as lesões, observouse massas de coloração esbranquiçada, constituídas pela frutificação de um fungo nas plântulas mantidas em viveiro. Dos tecidos infectados isolou-se Cylindrocladium clavatum, que foi inoculado no colo de plântulas sadias, na emissão da terceira e quarta folha. As plantas inoculadas foram mantidas em câmara com umidade saturada à 25°C por 10 dias. Adotou-se quatro tratamentos: plântulas inoculadas e não inoculadas, 24 h após o transplante, e plântulas inoculadas e não inoculadas, sem transplante prévio. Nas plântulas inoculadas com e sem transplante foram verificados 59,4% e 100% de tombamento, respectivamente após o oitavo dia da inoculação. No CENARGEN, em condições de casa de vegetação foram observadas lesões escuras na base do colo e deste tecido isolou-se Fusarium oxysporum. Plântulas sadias foram inoculadas com o fungo, seguindo os mesmos procedimentos utilizados na inoculação com Cylindrocladium clavatum, mas com umidade saturada por apenas 24 horas. Foram inoculadas também sementes aparentemente sadias. Após a inoculação, as sementes foram divididas em dois lotes. Sementes do primeiro lote foram semeadas em solo esterilizado e mantidas em casa de vegetação. O segundo lote de sementes foi colocado para germinar em papel toalha e mantido em germinador. As sementes mantidas em germinador, inoculadas ou não, emitiram a radícula, mas o tamanho da radícula das plântulas inoculadas apresentou uma taxa de crescimento médio inferior a 75 % em relação à testemunha. Em plântulas oriundas de sementes inoculadas e colocadas para germinar em solo observou-se apenas uma pequena redução na altura das plântulas. A deposição do inóculo no colo das plantas não reproduziu sintomas do fungo.