Expressão heteróloga de fragmentos de anticorpos ancorados à parede de Saccharomyces boulardii

Abstract

A Colite Ulcerativa se destaca como uma das doenças inflamatórias intestinais (DII) de caráter crônico onde a inflamação pode se estender do reto até o cólon. Atualmente não existe cura para a colite e os tratamentos são focados em melhorar a qualidade de vida dos pacientes reduzindo sintomas. Tratamentos que utilizam anticorpos monoclonais se mostram mais eficientes em pacientes acometidos do que tratamentos focados em Ácido Aminossalicílico combinado com Corticosteroides. Porém, o custo de produção e purificação de anticorpos monoclonais é alto, o que dificulta a distribuição deste tipo de medicamento de forma ampla a população. Probióticos além de serem capazes de auxiliar no restauro da microbiota normal saudável, também tem mostrado significativo avanço na expressão de proteínas recombinantes. A levedura Saccharomyces boulardii tem aplicação probiótica, sendo utilizada para auxiliar no tratamento de doenças intestinais. Foi proposto nesse trabalho utilizá-la como modelo de entrega de terapias orais na forma de anticorpos. O uso de um anticorpo anti-CD3 por via oral pode, em tese, produzir resposta local anti-inflamatória para o tratamento de Colite Ulcerativa. Para testar a produção de molécula, tipo anticorpo, fragmento variável de cadeia única (scFv) em S. boulardii, Construiu-se um vetor de expressão contendo a sequência para um scFv anti-CD3, fusionado ao gene SED1, proteína nativa de parede celular. A expressão do scFv recombinante associado a parede da levedura foi confirmada por Imunodetecção na fração celular insolúvel. A linhagem recombinante de S. boulardii produtora de scFv anti-CD3 foi administrada via oral em camundongos com colite induzida por dextrana sulfato de sódio. Os resultados demonstraram melhora no índice de atividade da doença e mudança positiva no perfil da microbiota fecal quando comparado ao grupo que não recebeu tratamento.