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Título: Expressão heteróloga de fragmentos de anticorpos ancorados à parede de Saccharomyces boulardii
Autor(es): Olinto, Vitor Guimaraes
Orientador(es): Brígido, Marcelo de Macedo
Assunto: scFv
ANTI-CD3
Colite ulcerativa
Microbiota intestinal
Saccharomyces boulardii
Inflamação intestinal
Data de publicação: 23-Jan-2024
Referência: OLINTO, Vitor Guimaraes. Expressão heteróloga de fragmentos de anticorpos ancorados à parede de Saccharomyces boulardii. 2023. 77 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, 2023.
Resumo: A Colite Ulcerativa se destaca como uma das doenças inflamatórias intestinais (DII) de caráter crônico onde a inflamação pode se estender do reto até o cólon. Atualmente não existe cura para a colite e os tratamentos são focados em melhorar a qualidade de vida dos pacientes reduzindo sintomas. Tratamentos que utilizam anticorpos monoclonais se mostram mais eficientes em pacientes acometidos do que tratamentos focados em Ácido Aminossalicílico combinado com Corticosteroides. Porém, o custo de produção e purificação de anticorpos monoclonais é alto, o que dificulta a distribuição deste tipo de medicamento de forma ampla a população. Probióticos além de serem capazes de auxiliar no restauro da microbiota normal saudável, também tem mostrado significativo avanço na expressão de proteínas recombinantes. A levedura Saccharomyces boulardii tem aplicação probiótica, sendo utilizada para auxiliar no tratamento de doenças intestinais. Foi proposto nesse trabalho utilizá-la como modelo de entrega de terapias orais na forma de anticorpos. O uso de um anticorpo anti-CD3 por via oral pode, em tese, produzir resposta local anti-inflamatória para o tratamento de Colite Ulcerativa. Para testar a produção de molécula, tipo anticorpo, fragmento variável de cadeia única (scFv) em S. boulardii, Construiu-se um vetor de expressão contendo a sequência para um scFv anti-CD3, fusionado ao gene SED1, proteína nativa de parede celular. A expressão do scFv recombinante associado a parede da levedura foi confirmada por Imunodetecção na fração celular insolúvel. A linhagem recombinante de S. boulardii produtora de scFv anti-CD3 foi administrada via oral em camundongos com colite induzida por dextrana sulfato de sódio. Os resultados demonstraram melhora no índice de atividade da doença e mudança positiva no perfil da microbiota fecal quando comparado ao grupo que não recebeu tratamento.
Abstract: Ulcerative Colitis stands out as one of the chronic inflammatory bowel diseases in which inflammation can extend from the end of the rectum all the way to the colon. Currently there is no cure for colitis and treatments focus on improving life quality of patients by reducing symptoms, treatments using monoclonal antibodies are more efficient in affected patients than treatments focused on Aminosalicylic acid combined with Corticosteroids. The cost of producing and purifying monoclonal antibodies is high, which makes it difficult to distribute it widely to the population. Probiotics in addition to being able to assist in the restoration of normal healthy microbiome have also shown significant progress in the expression of recombinant proteins, Saccharomyces boulardii is a probiotic yeast used to assist in the treatment of intestinal diseases and can be adapted for the delivery of therapies oral. Using S. boulardii as a delivery vehicle for anti-CD3 antibodies can generate a local anti-inflammatory response assisting on the treatment of Ulcerative Colitis. To test the production of antibody fragments in S. boulardii, we produced an expression vector containing an anti-CD3 scFv fused to the SED1 gene, a native cell wall protein. The expression of the scFv associated with the fungal wall was evaluated by Immunodetection focusing on the insoluble cell fraction showing the presence of the recombinant protein. The transforming strain S. boulardii producing anti-CD3 scFv were administered orally in mice with colitis induced by dextran sodium sulfate, showing improvement in the disease activity index and a positive change in the fecal microbiome profile when compared to the group that did not receive treatment.
Unidade Acadêmica: Instituto de Ciências Biológicas (IB)
Departamento de Biologia Celular (IB CEL)
Informações adicionais: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2023.
Programa de pós-graduação: Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular
Licença: A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.unb.br, www.ibict.br, www.ndltd.org sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra supracitada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.
Agência financiadora: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF).
Aparece nas coleções:Teses, dissertações e produtos pós-doutorado

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