Estudo do efeito adipogênico dos agrotóxicos bitertanol e óxido de fembutatina em cultura de células

Abstract

O Brasil é um dos maiores consumidores mundiais de agrotóxicos. Muitos dos danos à saúde relacionados à exposição a essas substâncias ainda estão sob investigação. Trabalhos recentes evidenciam que alguns desses compostos podem atuar como obesogênicos ambientais, que são substâncias capazes de desregular o sistema endócrino, promover adipogênese e contribuir para o desenvolvimento da obesidade. Estudos preliminares e não publicados do grupo de pesquisa do qual faço parte, mostraram que os agrotóxicos bitertanol e óxido de fembutatina promoveram acúmulo lipídico em pré-adipócitos 3T3-L1, sendo que o óxido de fembutatina ativou o PPAR. Considerando o uso intensivo de agrotóxicos no Brasil e os poucos estudos relacionados ao seu efeito desregulador endócrino, o presente estudo objetivou investigar outros mecanismos que podem estar relacionados ao efeito adipogênico promovido por essas substâncias, bem como avaliar seus possíveis efeitos sobre outros receptores nucleares. Para avaliar o efeito dos agrotóxicos sobre a atividade transcricional dos receptores nucleares GRα, PPARα, PPARβ/δ, TRα, TRβ e PXR, foi realizado o ensaio de transfecção e gene repórter da luciferase. Para tanto, células HeLa foram co-transfectadas com os plasmídeos contendo o DNA complementar do receptor nuclear e com os plasmídeos contendo seus respectivos elementos responsivos fusionados ao gene repórter da luciferase e tratadas por 24 horas com DMSO, com agonistas conhecidos dos receptores em estudo ou com concentrações crescentes dos agrotóxicos bitertanol e óxido de fembutatina. Esse ensaio também foi realizado para avaliar se a cisteína 285, localizada no LBD do PPARγ, é importante para a ativação desse receptor pelo óxido de fembutatina. Considerando que tanto o bitertanol quanto o óxido de fembutatina induziram acúmulo lipídeo em células 3T3-L1, foi avaliado se esse efeito era dependente de PPARγ. Para tanto, células 3T3-L1 foram tratadas durante 15 dias, na presença ou ausência do antagonista de PPARγ T0070907, com veículo (DMSO), rosiglitazona ou concentrações dos agrotóxicos que promoveram acúmulo lipídico. No ensaio de transfecção e gene repórter, tanto o bitertanol quanto o óxido de fembutatina não apresentaram atividade agonista sobre os receptores avaliados. No ensaio utilizando o PPARγ com a mutação C285S, observou-se que a substituição da cisteína pela serina, aboliu a atividade transcricional, sugerindo que esse aminoácido é essencial para o efeito agonista do óxido de fembutatina sobre o PPARγ. No ensaio de diferenciação, a presença do antagonista T0070907, reduziu de forma significativa o acúmulo lipídico induzido por ambos os agrotóxicos, indicando que esse efeito ocorre via PPARγ. Os resultados desse trabalho podem contribuir para a melhor compreensão dos impactos que os agrotóxicos podem causar na saúde humana e de outros animais. Adicionalmente, podem fundamentar decisões governamentais relativas ao emprego desses compostos, bem como incentivar a busca por ativos eficientes, sem ou com menores impactos negativos. Entretanto, mais estudos são necessários para melhor elucidar seus mecanismos de ação.