DNA genômico de Estreptococos e Escherichia coli em sangue e aspirado traqueal e gástrico de recém-nascidos intubados imediatamente após o nascimento

Abstract

Embora no Centro-Oeste mais de 98% das mulheres façam consultas pré-natais, a prematuridade extrema exige cada vez mais leitos em nossas unidades de terapia intensiva neonatais. As infecções bacterianas são importante causa de morbidade e mortalidade neonatal, apesar dos avanços nos cuidados oferecidos às gestantes e neonatos. A Sepse neonatal precoce está associada a microorganismos colonizadores do trato geniturinário materno que são adquiridos pelo recém nascido durante o nascimento. Em 1996 o Centers for Disease Control, instituiu estratégias preventivas para a doença neonatal com o uso de antibióticoterapia profilática intraparto em gestantes com fatores de risco para infecção. Houve um decréscimo de 70% na incidência de sepse precoce por Estreptococo do Grupo B, diminuindo de 12.000 para 7600 casos e de 1.600 mortes por ano para 310, respectivamente nos Estados Unidos da América. Justificativa A doença neonatal precoce geralmente se apresenta com quadro de septicemia ou desconforto respiratório grave, levando os neonatos à ventilação mecânica, com alta taxa de morbidade e mortalidade. As conseqüências da infecção podem ser severas, com mortalidade de até 50% se não tratados. Objetivo: Detectar DNA genômico bacteriano no aspirado traqueal, gástrico e sangue de recém nascidos, utilizando os fatores de risco para o diagnóstico de infecção neonatal do Centers for Disease Control fazendo a identificação rápida de Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae e Escherichia coli nestes espécimes. Metodologia: Utilizar a Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real para identificar sequências genômicas dos agentes S. pneumoniae, S. agalactiae e E. coli no aspirado pulmonar e S.agalactiae e E. coli no aspirado gástrico e sangue de recém nascidos submetidos à ventilação mecânica logo após a intubação. Resultado: A Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real detectou amplicons de segmentos genéticos de E. coli em 14 (43,75%) de 32 amostras de secreção traqueal, em 4 (26,67%) de 15 amostras de secreção gástrica e em 7 (31,82%) de 22 amostras de sangue periférico. Amplicons de segmentos genéticos de S. agalactiae foram encontrados em uma (3,13%) de 32 amostras de secreção traqueal, em três (20%) de 15 amostras de secreção gástrica e não foi encontrado nas 22 amostras de sangue dos RN pesquisados. Os amplicons de segmento genético de S. pneumoniae foram investigados em 45 amostras de aspirado traqueal e detectados em 12 (26,67%) delas. A viabilidade das amostras na quantificação de DNA foi de 32/80 (40%) amostras de aspirado traqueal, 15/75 (20%) de aspirado gástrico e 22/45 (48,9%) das amostras de sangue. Conclusão A Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real, ainda incipiente no Brasil, permitiu identificar o material genético dos agentes nos materiais estudados de maneira rápida, possibilitando a utilização em estudos epidemiológicos com casuísticas maiores. Os primers desenhados foram adequados e o estudo foi possível naquelas amostras com DNA genômico em quantidade acima de 5 ng/µl. Embora em todos os espécimes pesquisados a quantidade de DNA genômico tenha sido muito pequena, o mais viável foi o sangue pela maior quantidade de DNA genômico encontrado, mas o aspirado traqueal e gástrico também pode ser utilizado. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT

Although in Brazil Center-West more than 98% of the women make appointments of prenatal examinations, the extreme prematurity demands increasing number of Neonatal Intensive Care Unit (NICU) beds. Bacterial infections are important causes of neonatal morbid-mortality, despite the advances on medical care offered to the pregnant women and newborns. The neonatal early sepsis is associated with microorganisms that colonize the maternal genitourinary tract, and are acquired by the newborn during birth. In 1996 the Center for Disease Control (CDC), created preventive strategies to neonatal disease, with the use of intrapartum antimicrobial prophylaxis in pregnant mothers with risk factors for infection. There was a decrease of 70% on the incidence of early sepsis by EGB, with a decrease of 12.000 to 7.600 cases and of 1.600 to 310 deaths by year, respectively in USA. Justification: The early neonatal disease generally presents as a sepsis clinical symptoms or severe respiratory distress, leading the newborns to mechanical ventilation, with a high number of neonatal morbid-mortality. The infection consequences can be severe, with the mortality as high as 50% when not treated. Objective: To verify bacterial genomic DNA extracted from newborn’s tracheal, gastric secretions and blood of newborns with the CDC risk factors of neonatal infection to a fast identification of Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae and Escherichia coli on these specimens. Metodology: To use the Real Time PCR (PCRrt) to identify the genomic sequences of S. pneumoniae, S. agalactiae and E. coli agents on the tracheal secretion and S. agalactiae and E. coli on gastric secretion and blood of newborns under mechanical ventilation soon after the intubation. Results: The PCRrt detected amplicons of genetic segments of E. coli was found in 14 (43,75%) of 32 samples of tracheal secretion, in 4 (26,67%) of 15 samples of gastric secretion and in 7 (31,82%) of 22 samples of blood. Amplicons from genetic segments of Streptococcus agalactiae were found in one (3,13%) out of 32 samples of tracheal secretion, in three (20%) out of 15 samples of gastric secretion and were not found on the 22 blood samples of the newborns under this research. Amplicons from genetic segments of S. pneumoniae were found in 12 (26,67%) out of 45 samples of tracheal secretion of the newborns. The viability of the samples on the DNA quantification was of 32/80 (40%) samples of tracheal aspirate, 15/75 (20%) of gastric aspirate and 22/45 (48,9%) of the blood samples. Conclusion: The Polymerase Chain Reaction in real time, still incipient in Brazil, was effective to identify the agent’s amplicons on the studied materials in a fast way, allowing for use in epidemiological studies with larger samples. The primers designed were appropriate and the study was effective on samples where genomic DNA were found on quantities up to 5 ng/µl. Although in all specimens researched the quantities of genomic DNA were very small, the viability of samples was better in the blood where the genomic DNA was found in greater quantity but the tracheal and gastric aspirate can also be used.