pHluorin-GRvT, um novo plasmídeo para transformação de Cryptococcus neoformans

Abstract

A infecção por Cryptococcus neoformans tem grande relevância global, configurando-se como a principal causa de meningite fúngica no mundo. A criptococose acomete principalmente indivíduos imunocomprometidos, como pessoas com AIDS e também indivíduos saudáveis. Os mecanismos de evasão e a virulência do fungo tornam possível que este atravesse a barreira hematoencefálica e cause inflamação nas meninges cerebrais. Uma das hipóteses de como essa evasão ocorre é pelo controle da acidificação do microambiente, evitando-se o aumento do pH. Para melhor entender como ocorre a sobrevivência e morte do C. neoformans quando fagocitado por macrófagos foi construído um plasmídeo contendo dois genes que expressam proteínas de fluorescência. O gene pHluorin-SE expressa uma proteína sensível ao pH, enquanto o GRvT expressa uma proteína resistente ao pH, permitindo a documentação da morte e sobrevivência do fungo quando da interação com macrófagos e processo de acidificação. Após a utilização do método de biobalística o plasmídeo foi eficiente para transformação do C. neoformans, contudo a não expressão das proteínas de fluorescência revelaram a necessidade de melhor compreender o comportamento das proteínas de fluorescência em sistemas heterólogos.